正相？反相？手性分离模式如何选择？
哈喽，小伙伴们，还记得上个世纪五、六十年代震惊世界的“反应停事件”吗？反应停学名为沙利度胺thalidomide，结构见下图，其消旋体曾被用作缓解妊娠反应的药物。但是后来才发现其中的r-型异构体才是有效的抗呕吐成分，可减轻妊娠e心、呕吐等症状；而s-型异构体则会导致婴儿畸形，结果当时在西德、荷兰和日本等地区产生了大批的畸形儿。
随着生物工程和生命科学的发展，科学家已经认识到，手性化合物例如手性药物异构体尽管其物理和化学性质几乎wan全相同，只有旋光性不同，但它们在生物体内的生理活性和药理作用却存在很大的差别。为此，制药行业中，必须对有效成分的对映体进行拆分，而不能将其混合物作为药物出售。
采用液相色谱法分离手性化合物，是目前shou选方法之一，要考虑手性柱的固定相类型、分离模式及流动相溶剂。现在市面上手性固定相类型较多，手性色谱有正相分离和反相分离两种模式，流动相溶剂的选择与固定相、样品性质、分离模式有关。今天，小编就和大家聊聊，如何选择合适的手性分离模式。
正相分离模式
当样品溶于非极性溶剂中，选择正相分离模式。常用的流动相组合是烷烃类和醇类。其中，醇类起到了洗脱作用，烷烃类用来调节流动相的洗脱强度。
烷烃类试剂，可选择正己烷、正戊烷、异己烷、正庚烷，它们对样品分离没有太大影响，不会改变选择性和分离度，选择正己烷较多。
流动相中的醇类，对目标物的分离起关键作用，不同的醇有不同的选择性，且随着流动相中醇类的比例提高，目标峰的保留时间缩短。zui常用的醇类是乙醇和异丙醇，它们的洗脱能力是：乙醇>异丙醇。甲醇在烷烃中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烃中加入甲醇，最好同时加入一定量的乙醇，提高流动相的溶解性。
在手性色谱中，为改善目标物的峰形，需要在流动相中添加酸或者碱。如果目标物是酸性化合物，往往要在流动相中加入酸性添加剂，如三氟yi酸、乙酸、甲酸等。如果目标物是碱性化合物，要在流动相中加入碱性添加剂，如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或碱性添加剂的加入量一般为0.1%~0.3%，最大不超过0.5%，要注意色谱柱的ph耐受范围。
需要注意的是：
1、正相色谱柱安装前，必须先用合适的流动相冲洗整个仪器管路，包括进样器。有些试剂（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺（dmf）、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、thf）会破坏手性固定相的结构，请不要使用这些溶剂作为流动相的组成部分，或者作为样品稀释剂。如果有无法确定的，请咨询厂家。
2、色谱柱能使用纯甲醇或者纯乙腈作为流动相，如果要将正己烷换成甲醇或者乙腈，或者换成其他极性溶剂，需要用纯异丙醇作为溶剂充分过渡。
3、正相手性柱应避开含水的流动相。
“
应用案例
溴甲ji苯异丙酸消旋体的测定
液相条件
色谱柱：ultimate®cellu-j（4.6×250mm，5μm) 。
流动相：正己烷：乙醇：三氟yi酸（90：10：0.1）；
检测波长：220nm；
柱温：25℃；
流速：1ml/min；
进样量：10μl；
样品配置：1mg/ml，乙醇/正己烷（1/1）溶解。
反相分离模式
如果样品溶于含水极性溶剂时，选择反相分离模式。常用的流动相组合是有机相和水相。其中，水相用来调节流动相的洗脱强度，常用的水相可以是磷酸盐缓冲液，或者是纯水。有机相起到了洗脱作用，常用的有机相是乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇等，且有机相比例越高，目标物的保留时间越短。
“
应用案例
盐酸达泊xi汀的测定
液相条件
色谱柱：ultimate®cellu-jr（4.6×250mm，5μm) 。
流动相：甲醇：乙醇：二乙胺（95：5：0.1）；
检测波长：220nm；
柱温：20℃；
流速：0.6ml/min；
进样量：5μl；
样品配置：1mg/ml，甲醇溶解。
目前，月旭科技的手性固定相填料包括 cellu-d、cellu-j、amy-d等，可以满足绝大多数手性样品分离需求。各位小伙伴有手性样品分离或需要筛选柱子，欢迎联系月旭售前技术热线或当地销售。
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正相分离模式
当样品溶于非极性溶剂中，选择正相分离模式。常用的流动相组合是烷烃类和醇类。其中，醇类起到了洗脱作用，烷烃类用来调节流动相的洗脱强度。
烷烃类试剂，可选择正己烷、正戊烷、异己烷、正庚烷，它们对样品分离没有太大影响，不会改变选择性和分离度，选择正己烷较多。
流动相中的醇类，对目标物的分离起关键作用，不同的醇有不同的选择性，且随着流动相中醇类的比例提高，目标峰的保留时间缩短。zui常用的醇类是乙醇和异丙醇，它们的洗脱能力是：乙醇>异丙醇。甲醇在烷烃中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烃中加入甲醇，最好同时加入一定量的乙醇，提高流动相的溶解性。
在手性色谱中，为改善目标物的峰形，需要在流动相中添加酸或者碱。如果目标物是酸性化合物，往往要在流动相中加入酸性添加剂，如三氟yi酸、乙酸、甲酸等。如果目标物是碱性化合物，要在流动相中加入碱性添加剂，如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或碱性添加剂的加入量一般为0.1%~0.3%，最大不超过0.5%，要注意色谱柱的ph耐受范围。
需要注意的是：
1、正相色谱柱安装前，必须先用合适的流动相冲洗整个仪器管路，包括进样器。有些试剂（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺（dmf）、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、thf）会破坏手性固定相的结构，请不要使用这些溶剂作为流动相的组成部分，或者作为样品稀释剂。如果有无法确定的，请咨询厂家。
2、色谱柱能使用纯甲醇或者纯乙腈作为流动相，如果要将正己烷换成甲醇或者乙腈，或者换成其他极性溶剂，需要用纯异丙醇作为溶剂充分过渡。
3、正相手性柱应避开含水的流动相。
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液相条件
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流动相：正己烷：乙醇：三氟yi酸（90：10：0.1）；
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柱温：25℃；
流速：1ml/min；
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反相分离模式
如果样品溶于含水极性溶剂时，选择反相分离模式。常用的流动相组合是有机相和水相。其中，水相用来调节流动相的洗脱强度，常用的水相可以是磷酸盐缓冲液，或者是纯水。有机相起到了洗脱作用，常用的有机相是乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇等，且有机相比例越高，目标物的保留时间越短。
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