乙型肝炎病毒(hbv)每年导致超过80万人死亡。在亚洲和撒哈拉以南非洲等许多发展中地区,它仍是一个威胁健康的因素。hbv倾向于在人肝细胞中显现和复制,并且主要从母亲到后代进行垂直传播。此外,暴露于受感染的体液(即共用针头,与感染者性交)也会导致传播。
hbv属于hepadnaviridae病毒家族的双链dna(dsdna)病毒,疫苗已接种近四十年。然而,常规hbv疫苗接种方案依赖于肌肉内由s.derevisiae细胞转染产生的小乙型肝炎表面(shbs)蛋白。值得注意的是,shbs只是三种主要治疗hbv抗原中的一种,并且文献表明针对剩下的两个抗原表位,即pre-s1和pre-s2表位,可能会带来有效的优势。
最近,yu-ching lee博士使用openspr的局域表面等离子体共振技术获得了所需的关键数据,并发表文章“s17抗体与乙型肝炎病毒pre-s2表位的功能性结合区域的相互作用”,研究过程中用openspr获得的数据探测了单链可变片段(scfv)抗体与pre-s2表位之间的相互作用,其可能增强了现有hbv的方案。
摘要
hbv由三种主要的病毒包膜蛋白组成,称为乙型肝炎表面蛋白(hbs),它由226个氨基酸残基的小乙型肝炎表面蛋白(shbs),281个残留的中间乙型肝炎表面蛋白(mhbs)和400个残留大型乙型肝炎表面蛋白(lhbs)。传统的疫苗接种方案是在20世纪80年代发展起来的,它是围绕着shbs的肌肉组织,其中转染的酵母细胞是该抗原的制造者,随后将其配置成商业剂。然而,接种疫苗后无应答者的人数很多,这就是为什么需要找出更有效的免疫保护方法的原因。
文章表明,在法中使用mhbs和lhbs(分别为pre-s1和pre-s2表位)已在鼠模型中被证明是有效的预防性的疫苗接种方案。先前的研究还表明,pre-s1/s表位的引入也可以为更持久的hbv感染提供有效的干预。具体来说,pre-s2抗原表位被认为是乙肝病毒对肝细胞的一种主要调节剂,是hb病毒入侵肝细胞的标志。值得注意的是,患者暴露于pre-s2表位引发比其他上述表位表现出更高的免疫应答;该多肽的残基123-145因与有效中和作用相关而臭名昭著。通过这种方式,pre-s2的表位与工程化抗体的相互作用已成为免疫学家的热门研究。
在这篇文章中,研究人员采用噬菌体表面呈现技术从hbv患者中分离人scfv,随后通过elisa和western blots选择主要候选物进一步分析pre-s2表位。在scfv抗体用流式细胞术和免疫细胞化学染色后,s17被用于计算机模拟和表面等离子体共振(spr)检测。
分析
表面等离子体共振研究的结果表明,scfv s17是hbv病毒包膜上发现的针对pre-s2表位的非常强的中和剂。因此需要注意的是,完整的igg分子结构的结合可能会提高亲和力。
openspr对此项研究的帮助
openspr具有操作简单、不受温度及缓冲液折射率影响、出结果速度快,检测稳定灵敏等特点,本研究利用openspr的表面等离子体共振(spr)技术快速的确定了pre-s2表位和scfv抗体s17之间的相互作用。实验将pre-s2肽固定在链霉抗蛋白传感器上,并在openspr系统上进行抗体-抗原反应实验。通过使用openspr,作者能够确定s17抗体与固定的pre-s2表位之间相互作用的动力学数据(结合和解离速率常数,平衡常数和亲和力)。 spr结合曲线显示s17在与pre-s2相互作用方面是有效的,并且来自该实验的定量数据表明平衡解离常数(kd)为4.2x10-8m。由该研究产生的结果表明scfv s17抗体可以作为通过靶向hbv pre-s2表位的有效剂,并且可以转化为改进的针对hbv感染的疫苗接种方案。通过使用openspr,研究人员能够从他们自己的工作平台获得spr数据,这有助于他们加快研究并更快地发布他们的发现。
spr是一项无标记的检测技术,研究人员可以定量分析两种生物分子之间的结合。 spr技术使我们能够确定相互作用的kon,koff和kd,与仅提供终点测量的其他技术如pull-down实验相比,更能深入了解分子间的相互作用。 spr不仅对于发表文章是必要的,而且对于许多医学和医学研究领域的发展也是必要的,如下图所示,近几年,依靠spr数据发表的文章数量呈显著增长。
scientific publications involving spr have increased drastically over the years. spr has become fundamental for publications while traditional techniques like western blots are becoming less important
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