细胞消化的方法有哪些？
细胞消化的方法有哪些？
我们的细胞在培养时大部分会以贴壁的形式生长，它们在机体内时，也是与其他细胞或者细胞外基质结合的。细胞培养过程中使用的wan全培养基中的血清，含有许多带阳性电荷的促细胞附着因子(层黏连蛋白 laminine、纤维连接蛋白 fibronectin 等胞外基质），能帮助细胞附着于带阴性电荷的底物上，并形成连接、贴壁伸展。使细胞解除这种附着，就是细胞消化。那么你知道细胞消化的方法有哪些吗？让我们一起来看看吧！
一、机械消化法
直接用培养基吹打或使用细胞刮刀，通过外力使细胞解除贴壁状态，一般用于不需要继续培养的细胞，相较于其他方法，机械消化法无法量化控制，细胞分散效果差，且会造成大量细胞破损，影响细胞传代状态。
二、离子螯合法
细胞膜表面蛋白大多需要钙、酶离子来维持与胞外基质的稳定键结，当然也包含各种粘附蛋白（如：整合素、钙黏着蛋白、桥粒等），螯合剂会在不破坏细胞膜表面蛋白的状况下，抽离这些离子，使粘附蛋白失活而减少细胞-细胞间及细胞-底物间的连接作用，使细胞容易与培养底物分离。
0.02% edta是常用的离子螯合剂，在37℃效果最jia（消化敏感的细胞可在4℃作用），适用于消化一般贴壁性细胞或细胞表面标记实验细胞。
但edta无法用血清终止其反应，所以在消化细胞后必须用缓冲盐溶液（如：pbs）清洗离心，以免影响后续细胞贴壁效果。
三、酶消化法
用蛋白水解酶消化连接细胞及培养底物的蛋白质，适用于消化贴壁性稍强的细胞。上述实验方法中最常见的还是胰酶消化。大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，但是我们发现吸去胰蛋白酶后，残留的那些附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2分钟足够消化细胞（绝大部分1分钟不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是先采用pbs润洗细胞吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化细胞。
更多有关细胞消化的方法，请联系天津益元利康生物科技有限公司。
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二、离子螯合法
细胞膜表面蛋白大多需要钙、酶离子来维持与胞外基质的稳定键结，当然也包含各种粘附蛋白（如：整合素、钙黏着蛋白、桥粒等），螯合剂会在不破坏细胞膜表面蛋白的状况下，抽离这些离子，使粘附蛋白失活而减少细胞-细胞间及细胞-底物间的连接作用，使细胞容易与培养底物分离。
0.02% edta是常用的离子螯合剂，在37℃效果最jia（消化敏感的细胞可在4℃作用），适用于消化一般贴壁性细胞或细胞表面标记实验细胞。
但edta无法用血清终止其反应，所以在消化细胞后必须用缓冲盐溶液（如：pbs）清洗离心，以免影响后续细胞贴壁效果。
三、酶消化法
用蛋白水解酶消化连接细胞及培养底物的蛋白质，适用于消化贴壁性稍强的细胞。上述实验方法中最常见的还是胰酶消化。大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，但是我们发现吸去胰蛋白酶后，残留的那些附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2分钟足够消化细胞（绝大部分1分钟不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是先采用pbs润洗细胞吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化细胞。
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