Oligo赛道想超车，纯化干燥工艺如何选择？
随着寡核苷酸的应用越来越广泛，不少企业相继加入寡核苷酸合成的赛道。想得到优质高纯度的核酸不是一件简单的事，寡核苷酸的合成通常会导致不可避免的杂质积累，它们可能会与全长产品竞争，或者抑制反应，因此选择高效率高质量的纯化和干燥工艺是很有必要的。那么对于工业级别的寡核苷酸纯化，一般又有哪些方法呢？且听小编跟您慢慢分享。
寡核苷酸的应用
oligo即寡核苷酸链，分子实验室常用的pcr引物、ngs捕获探针、qpcr探针和fish探针等都是寡核苷酸。除了引物探针以外，还可作为核酸药物用于遗传疾病、肿瘤、病毒感染和感觉器官等疾病的治疗或预防。
探针及引物主要用于ivd试剂盒，面对需求量巨大的检测试剂盒，上游原材料的质量和供应速度应该同幅度进步和增长，在引物和探针的制备过程中，提高生产效率以及产物纯度更是重中之重。
纯化方式
对于不同的寡核苷酸链，应该如何选择合适的纯化方法？下面列举了几种常见的纯化方法。
dsl（脱盐）纯化
利用反相c-18层析柱进行脱盐，它对dna有特异性的吸附，一些杂质，如氨、盐，不能被吸附，所以能有效地去除盐分等杂质。该方法不能有效去除比目的dna短的小片段，所以适用于要求较低的pcr普通引物。
图1：dsl纯化制备流程图
opc纯化
根据dna保护基（dmtr基）和cartridge柱中树脂间的亲合力作用的原理进行纯化目的dna片段。该方法得到目的dna的纯度能达到95%以上,但受柱容量影响，适用于40mer以下的普通引物。
图2：opc纯化制备流程图
page纯化聚彬稀酰胺凝胶电泳
使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对引物dna进行分离，然后从凝胶中回收目的dna。page纯化法也是一种非常有效的dna纯化方法，纯化后的dna纯度大于90%，对长链(大于50mer)普通引物的纯化特别有效。
图3：page纯化制备流程图
hplc高效液相色谱法
根据寡核苷酸的疏水性对dna片段进行纯化分离，该方法能达到很高的纯度和灵敏度，可以有效去除n-1短片段，目标dha的纯度大于95%。适用于对纯度要求高的短链（小于40 mer）普通引物、修饰引物，尤其适合及荧光标记探针的纯化。
若想得到纯度很高的寡核苷酸片段，hplc法也常被用于与其他方式双重联合（如hplc_page、hplc_ce、2xhplc等）。
图4：hplc纯化制备流程图
引物干燥过程中的质量控制考虑
引物合成纯化后都会产生一定的有机溶剂（如乙腈、甲醇、水等），需要采用真空离心浓缩设备将寡核苷酸干燥成干粉状，一般包装至ep管或者96孔板中。
图5：引物生产流程
作为分子诊断qpcr试剂盒中的核心原料，qpcr引物及taqman探针的质量直接影响了靶标检测的准确性，所以选择干燥工艺也十分关键，在干燥过程的质量控制需尽考虑以下几个方面：
样品保护和温度控制
在寡核苷酸的干燥过程中，尽量避免加热源直接照射在样品上而导致样品局部过热。红外加热模式，不直接加热样品，这样确保了样品的温度不会高于样品支架的温度，保证了样品的安全。sampleshield温度控制系统，采用非接触式温度探测用以在整个离心过程中，检测样品和离心腔的温度变化，确保整个蒸发过程受到质控。
避免交叉污染
由于溶剂蒸发的过程中，低沸点溶剂和混合溶剂容易产生暴沸而导致样品损失和交叉污染，这会直接影响样品纯度。dri-pure防爆沸技术，控制真空度下降梯度和施加500g的离心力，让用户处理96孔板或384孔板等密集型容器时，无需担心样品交叉污染。
高通量
选用通量高、干燥效率快的干燥手段对寡核苷酸的制备过程事半功倍，genevac浓缩仪可批量处理样品：一次可以处理几百个甚至上千个样品，全系列产品都有专门适配ep管和96孔板的铝制实心转子。如ht-12一次可以浓缩384个1.5ml ep管或24块96孔板，大大提高了研发和生产效率。
自动停机
在制备大量的寡核苷酸样品时，无需值守的自动停机功能派上用场，使寡核苷酸样品干燥后立即自动停止蒸发，为核酸样品提供双重保护机制。
应用案例
wtchg（牛津大学人类遗传学威康信托中心)使用sequenom massarray®snp基因分型系统用于snp分析，样品前制备过程分别使用风干（左）和genevac ez-2真空离心浓缩仪（右）干燥含有寡核苷酸样品的384孔板。
下图结果表明，使用ez-2真空离心浓缩仪干燥寡核苷酸样品，可以大大降低样品降解率，保证样品不会被污染，消除了样品损坏的潜在来源。
图6：在空气干燥(左)和ez-2蒸发器干燥(右)后的序列样品质量分析
*深绿色-高样本数据质量
*浅绿色-中等样本数据质量
*红色-样品质量差或无数据
图7：空气干燥(左)和ez-2蒸发器干燥(右)后的snp分析
genevac真空离心浓缩仪
离心浓缩作为ivd原料合成制备的关键技术之一，具有通量高、干燥效率高、保护样品等特点，真空离心使浓缩过程都保持在较温和的环境中，提高寡核苷酸的产品纯度与收率，在工艺选择开发和放大中建立良好的工艺空间。
一台高通量真空离心浓缩仪就可以做到浓缩干燥一步到位，可以直接作为生产设备投入到生产中，缩短整个oligo制备过程，例如上述实验中所提到的genevac ez-2真空离心浓缩仪。这边我们为大家推荐下面几款genevac旗下的真空离心浓缩仪。
无锡市“无废城市”建设专家库成员征集开始啦！
群创QCT新产品介绍微型压力变送器
一体化污水处理好设备
SBJ 型深水曝气搅拌两用机产品简介
湖北省XMB-CT-1000窑炉气体在线分析仪厂家供应
Oligo赛道想超车，纯化干燥工艺如何选择？
同比增长150% 锂离子电池增产背后的科技发展
美国CAT猫牌柱塞泵2530怎么配BADGER伺服电机控制阀1/2
二手紫外激光打标机
分享质量控制物质的概念及用途！
衬胶钢管技术
全自动打包机的防水妙招
农情监测设备-一款智慧农业用农业四情监测系统
调节阀就地维修和按日常拆卸
程控定量封口机 总大肠专用
气相色谱法测定白酒中醇、酸、酯误差原因
圆锥形水面标记太阳能警示浮标
大型储水水箱材质 PE水箱优势表现
圆顶阀密封圈之主要特性
杀菌锅的使用和保养
寡核苷酸的应用
oligo即寡核苷酸链，分子实验室常用的pcr引物、ngs捕获探针、qpcr探针和fish探针等都是寡核苷酸。除了引物探针以外，还可作为核酸药物用于遗传疾病、肿瘤、病毒感染和感觉器官等疾病的治疗或预防。
探针及引物主要用于ivd试剂盒，面对需求量巨大的检测试剂盒，上游原材料的质量和供应速度应该同幅度进步和增长，在引物和探针的制备过程中，提高生产效率以及产物纯度更是重中之重。
纯化方式
对于不同的寡核苷酸链，应该如何选择合适的纯化方法？下面列举了几种常见的纯化方法。
dsl（脱盐）纯化
利用反相c-18层析柱进行脱盐，它对dna有特异性的吸附，一些杂质，如氨、盐，不能被吸附，所以能有效地去除盐分等杂质。该方法不能有效去除比目的dna短的小片段，所以适用于要求较低的pcr普通引物。
图1：dsl纯化制备流程图
opc纯化
根据dna保护基（dmtr基）和cartridge柱中树脂间的亲合力作用的原理进行纯化目的dna片段。该方法得到目的dna的纯度能达到95%以上,但受柱容量影响，适用于40mer以下的普通引物。
图2：opc纯化制备流程图
page纯化聚彬稀酰胺凝胶电泳
使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对引物dna进行分离，然后从凝胶中回收目的dna。page纯化法也是一种非常有效的dna纯化方法，纯化后的dna纯度大于90%，对长链(大于50mer)普通引物的纯化特别有效。
图3：page纯化制备流程图
hplc高效液相色谱法
根据寡核苷酸的疏水性对dna片段进行纯化分离，该方法能达到很高的纯度和灵敏度，可以有效去除n-1短片段，目标dha的纯度大于95%。适用于对纯度要求高的短链（小于40 mer）普通引物、修饰引物，尤其适合及荧光标记探针的纯化。
若想得到纯度很高的寡核苷酸片段，hplc法也常被用于与其他方式双重联合（如hplc_page、hplc_ce、2xhplc等）。
图4：hplc纯化制备流程图
引物干燥过程中的质量控制考虑
引物合成纯化后都会产生一定的有机溶剂（如乙腈、甲醇、水等），需要采用真空离心浓缩设备将寡核苷酸干燥成干粉状，一般包装至ep管或者96孔板中。
图5：引物生产流程
作为分子诊断qpcr试剂盒中的核心原料，qpcr引物及taqman探针的质量直接影响了靶标检测的准确性，所以选择干燥工艺也十分关键，在干燥过程的质量控制需尽考虑以下几个方面：
样品保护和温度控制
在寡核苷酸的干燥过程中，尽量避免加热源直接照射在样品上而导致样品局部过热。红外加热模式，不直接加热样品，这样确保了样品的温度不会高于样品支架的温度，保证了样品的安全。sampleshield温度控制系统，采用非接触式温度探测用以在整个离心过程中，检测样品和离心腔的温度变化，确保整个蒸发过程受到质控。
避免交叉污染
由于溶剂蒸发的过程中，低沸点溶剂和混合溶剂容易产生暴沸而导致样品损失和交叉污染，这会直接影响样品纯度。dri-pure防爆沸技术，控制真空度下降梯度和施加500g的离心力，让用户处理96孔板或384孔板等密集型容器时，无需担心样品交叉污染。
高通量
选用通量高、干燥效率快的干燥手段对寡核苷酸的制备过程事半功倍，genevac浓缩仪可批量处理样品：一次可以处理几百个甚至上千个样品，全系列产品都有专门适配ep管和96孔板的铝制实心转子。如ht-12一次可以浓缩384个1.5ml ep管或24块96孔板，大大提高了研发和生产效率。
自动停机
在制备大量的寡核苷酸样品时，无需值守的自动停机功能派上用场，使寡核苷酸样品干燥后立即自动停止蒸发，为核酸样品提供双重保护机制。
应用案例
wtchg（牛津大学人类遗传学威康信托中心)使用sequenom massarray®snp基因分型系统用于snp分析，样品前制备过程分别使用风干（左）和genevac ez-2真空离心浓缩仪（右）干燥含有寡核苷酸样品的384孔板。
下图结果表明，使用ez-2真空离心浓缩仪干燥寡核苷酸样品，可以大大降低样品降解率，保证样品不会被污染，消除了样品损坏的潜在来源。
图6：在空气干燥(左)和ez-2蒸发器干燥(右)后的序列样品质量分析
*深绿色-高样本数据质量
*浅绿色-中等样本数据质量
*红色-样品质量差或无数据
图7：空气干燥(左)和ez-2蒸发器干燥(右)后的snp分析
genevac真空离心浓缩仪
离心浓缩作为ivd原料合成制备的关键技术之一，具有通量高、干燥效率高、保护样品等特点，真空离心使浓缩过程都保持在较温和的环境中，提高寡核苷酸的产品纯度与收率，在工艺选择开发和放大中建立良好的工艺空间。
一台高通量真空离心浓缩仪就可以做到浓缩干燥一步到位，可以直接作为生产设备投入到生产中，缩短整个oligo制备过程，例如上述实验中所提到的genevac ez-2真空离心浓缩仪。这边我们为大家推荐下面几款genevac旗下的真空离心浓缩仪。
无锡市“无废城市”建设专家库成员征集开始啦！
群创QCT新产品介绍微型压力变送器
一体化污水处理好设备
SBJ 型深水曝气搅拌两用机产品简介
湖北省XMB-CT-1000窑炉气体在线分析仪厂家供应
Oligo赛道想超车，纯化干燥工艺如何选择？
同比增长150% 锂离子电池增产背后的科技发展
美国CAT猫牌柱塞泵2530怎么配BADGER伺服电机控制阀1/2
二手紫外激光打标机
分享质量控制物质的概念及用途！
衬胶钢管技术
全自动打包机的防水妙招
农情监测设备-一款智慧农业用农业四情监测系统
调节阀就地维修和按日常拆卸
程控定量封口机 总大肠专用
气相色谱法测定白酒中醇、酸、酯误差原因
圆锥形水面标记太阳能警示浮标
大型储水水箱材质 PE水箱优势表现
圆顶阀密封圈之主要特性
杀菌锅的使用和保养