细胞实验 | 细胞污染还是药物析出？-MedChemExpress
细胞培养 (cell culture) 也叫细胞克隆技术，是指在体外模拟体内环境，使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养是细胞和分子生物学中使用的关键工具，可以对细胞的生理学和生物化学进行建模，是生命科学研究中常用的研究手段。
图 1. 人输卵管组织原代细胞培养[1]
关于细胞污染
要想拥有一株健康的细胞，主打 8 个字 “悉心照料，小心呵护”；它就是你实验生涯中的 “爱宝”。尽管爱护备至，抛开丝滑的无菌操作技术，污染的因素还是防不胜防：细胞复苏过程的水浴，细胞培养箱层，水盘，培养箱柜门，包括各种实验仪器的盖子周围，这些都可能会为污染带来风险。如下图，不知受何因素污染的细胞和正常的细胞形态和状态有着鲜明的对比。细胞污染的种类一般可分成细菌、真菌，支原体污染等。
图2. 正常细胞与污染的细胞[2]
细菌污染
细菌污染是细胞培养中见的污染，常见的有枯草杆菌、大肠杆菌、分歧杆菌以及葡萄球菌污染等。它们的污染肉眼可见：细胞培养基还会随着细菌负荷的增加，变得浑浊，含有 ph 值指示物 (如中性或酚红) 的培养液会因细菌污染而酸化 (即变得更黄)。大多细菌在显微镜下观察呈现杆状和颗粒状形态，并且可以移动，光学显微镜下也可以观察到，例如下图细胞培养中分枝杆菌污染导致漂浮的团块。 图3.分歧杆菌污染的细胞[3]
真菌污染
真菌污染，比如霉菌污染和酵母菌污染等。一般受真菌污染的细胞，培养液是清亮的，但会出现絮状杂质，显微镜下观察道细丝状结构，可看到明显的菌丝，酵母可能表现为非常小的圆形细胞(单链或短链)，还可能出现出芽。污染不严重的情况下细胞仍可生长，但受污染细胞的活力状态明显变差。 图 4.酵母，青霉素等在光学显微镜下的外观[3]
mce小贴士：
用于细胞培养的器皿和培养液都需要严格无菌。若实验过程中所需的药物不建议被高温高压和辐照杀菌， 建议使用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌，可有效避免真菌和细菌污染。
针对细菌污染，在培养基中，加入青霉素-链霉素双抗，庆大霉素，氨苄青霉素或者卡那霉素等抗生素进行处理，可有效抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，从而有效控制细胞污染。预防霉菌污染可在培养基里加两性霉素或制霉菌素或d。
但无论是哪种污染， 一旦发生，很难去除细胞中的微生物污染，预防永远大于善后！
支原体污染
支原体污染可以改变细胞的特性，影响实验结果，导致实验结论不可靠。支原体是最小的独立生存生物，不能用可见光显微镜进行肉眼检查，因此可以在细胞培养物中长时间不被发现。它会诱导细胞参数的改变 (例如，染色体畸变，代谢和细胞生长的变化)，导致不可靠的实验结果(如下图红外显微镜下，dbtrg 细胞被支原体感染24小时候的形态变化)。
图 5.细胞系中支原体污染后细胞形态的变化[4]
支原体的污染可以通过专项检测，例如 pcr 或 dna 荧光染色来检测这类污染。
图 6.细胞系中支原体状态的 pcr 分析[5]
mce小贴士：
支原体污染细胞后，由于支原体体积很小，无法通过过滤的办法去除。如果不是极其难得的细胞，建议还是扔了吧。如果还想救一救，需要注意的是支原体没有细胞壁，因此对作用于细胞壁合成的抗生素是不敏感的。四环素类和大环内酯类抗生素对支原体有很好的抑制活性。
支原体清除试剂 bm-cyclin 有效抑制和清除在细胞培养中广泛存在的支原体污染，包括口腔支原体 mycoplasma orale、精氨酸支原体 mycoplasma arginini、猪鼻支原体 mycoplasma hyorhinis 等，从而挽救受到污染的珍贵细胞。
介绍完细胞培养常见污染种类之后，大家是不是有了一个初步概念了呢？但是，还有一种情况，从 “照骗” 来看， 妥妥的药物析出。
药物结晶析出
由于很多小分子水溶性不好，常用有机溶剂，如 dmso 配制母液，再稀释到培养基孵育细胞。稀释的过程中由于产品溶解性、温度、浓度等因素的影响，很容易出现药物析出，在显微镜下观察：一般会呈现出针状，雪花状或者点状结晶。有些童鞋就一不小心误认为是真菌菌丝了。图 7. 小分子药物在培养基中结晶析出
mce小贴士：
为避免药物析出，稀释前，可将母液和培养基 37℃ 预热，避免温度低造成严重析出。若稀释过程中出现化合物析出的情况， 可采用超声加热的方法使其复溶。
现在大家是不是能很好的区分药物析出和细胞污染及其种类了呢？以后遇到镜下观察有 “污染”，不要直接 “弃疗”，先判断一下是否为药物析出，兴许还有救~
相关产品
支原体清除试剂 bm-cyclin
主要成分为延胡索酸泰妙菌素 (tiamulin fumarate) 和盐酸米诺环素 (minocycline hydrochloride)，可在不影响细胞状态的前提下，有效抑制和清除在细胞培养中广泛存在的支原体污染，对于常见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用。
青霉/链霉素双抗溶液
已过滤除菌，可直接用于细胞培养的双抗溶液。产品添加到细胞培养液中， 可有 效抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，从而有效控制细胞污染。青霉素-链霉素溶液 (100×) 中，含有青霉素 g 钠盐 10 ku/ml，硫酸链霉素 10 mg/ml。
两性霉素 b 无菌溶液
一种多烯类抗真菌抗生素， 破坏真菌正常代谢并引起死亡，从而用于抑制真菌和酵母的污染。
庆大霉素无菌溶液
庆大霉素通过与细菌核糖 体 30s 亚基结合阻断细菌蛋白质的合成，可有效抑制多数革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌的生长。 细胞培养液中，庆大霉素的推荐工作浓度为 0.5-50 μg/ml。
抗生素-抗真菌素溶液
含青霉素 (10 ku/ml)、链霉素 (10 mg/ml)、两性霉素 b (25 μg/ml)。青霉素-链霉素可有效抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，两性霉素 b 可用于抑制真菌、酵母的污染。
潮霉素 b 无菌溶液
氨基糖苷类抗生素，主要通过干扰 70 s 核糖体易位和诱导对 mrna 模板的错读而抑制细胞蛋白质的正常合成，从而导致细菌、真菌和哺乳动物细胞死亡。
mce的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务
参考文献
[1]fotheringham s, levanon k, drapkin r. ex vivo culture of primary human fallopian tube epithelial cells. j vis exp. 2011 may 9;(51):2728.
[2]selcen çelik-uzuner, uğur uzuner. an extensive method for maintenance of sterility in mammalian cell culture laboratory routine. challenges 2017, 8(2), 26
[3]raymond w nims, paul j price. et al. best practices for detecting and mitigating the risk of cell culture contaminants . 2017 dec;53(10):872-879.
[4]katia wehbe , marzia vezzalini, gianfelice cinque. detection of mycoplasma in contaminated mammalian cell culture using ftir microspectroscopy. anal bioanal chem. 2018 may;410(12):3003-3016.
[5]cord c uphoff , hans g drexler. detecting mycoplasma contamination in cell cultures by polymerase chain reaction. methods mol med. 2004;88:319-26.
了解下图尔克抗冲击能力达200 G的线性位移传感器
简析颗粒称重包装机组成结构及工作过程
蒸汽杀菌锅设备停用时的封存和保养方法
硬轨立式加工中心有什么特点
厂一次性医用 医用防护 环氧乙烷成分含量检测成套仪器设备
细胞实验 | 细胞污染还是药物析出？-MedChemExpress
三相高压风机是一种用于提供高压气体的设备
智能涡街流量计常见故障以及5大维修方法
水利控制阀阀密封方法有哪些
真空油炸机的基本结构要素有哪些
怎样使用接触角测量仪
日本midori绿测器电位器LP-10FBS-3
陕西承试三级资质设备清单|陕西承装修试三级资质设备选型指南
天津市西青区大寺污水处理厂TOT项目公开招标公告
力士乐 二位三通和二位四通方向座阀 M-.SED6
喷嘴在西安凯驰高压清洗机中所起到的重要作用啊
标准砝码,标准砝码厂家,砝码在技术方面的要求
造纸厂压光设备降温器
自动感应门风淋室的维护保养方法有哪些？这十项要掌握住！
北京喷砂试验箱控制系统
图 1. 人输卵管组织原代细胞培养[1]
关于细胞污染
要想拥有一株健康的细胞，主打 8 个字 “悉心照料，小心呵护”；它就是你实验生涯中的 “爱宝”。尽管爱护备至，抛开丝滑的无菌操作技术，污染的因素还是防不胜防：细胞复苏过程的水浴，细胞培养箱层，水盘，培养箱柜门，包括各种实验仪器的盖子周围，这些都可能会为污染带来风险。如下图，不知受何因素污染的细胞和正常的细胞形态和状态有着鲜明的对比。细胞污染的种类一般可分成细菌、真菌，支原体污染等。
图2. 正常细胞与污染的细胞[2]
细菌污染
细菌污染是细胞培养中见的污染，常见的有枯草杆菌、大肠杆菌、分歧杆菌以及葡萄球菌污染等。它们的污染肉眼可见：细胞培养基还会随着细菌负荷的增加，变得浑浊，含有 ph 值指示物 (如中性或酚红) 的培养液会因细菌污染而酸化 (即变得更黄)。大多细菌在显微镜下观察呈现杆状和颗粒状形态，并且可以移动，光学显微镜下也可以观察到，例如下图细胞培养中分枝杆菌污染导致漂浮的团块。 图3.分歧杆菌污染的细胞[3]
真菌污染
真菌污染，比如霉菌污染和酵母菌污染等。一般受真菌污染的细胞，培养液是清亮的，但会出现絮状杂质，显微镜下观察道细丝状结构，可看到明显的菌丝，酵母可能表现为非常小的圆形细胞(单链或短链)，还可能出现出芽。污染不严重的情况下细胞仍可生长，但受污染细胞的活力状态明显变差。 图 4.酵母，青霉素等在光学显微镜下的外观[3]
mce小贴士：
用于细胞培养的器皿和培养液都需要严格无菌。若实验过程中所需的药物不建议被高温高压和辐照杀菌， 建议使用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌，可有效避免真菌和细菌污染。
针对细菌污染，在培养基中，加入青霉素-链霉素双抗，庆大霉素，氨苄青霉素或者卡那霉素等抗生素进行处理，可有效抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，从而有效控制细胞污染。预防霉菌污染可在培养基里加两性霉素或制霉菌素或d。
但无论是哪种污染， 一旦发生，很难去除细胞中的微生物污染，预防永远大于善后！
支原体污染
支原体污染可以改变细胞的特性，影响实验结果，导致实验结论不可靠。支原体是最小的独立生存生物，不能用可见光显微镜进行肉眼检查，因此可以在细胞培养物中长时间不被发现。它会诱导细胞参数的改变 (例如，染色体畸变，代谢和细胞生长的变化)，导致不可靠的实验结果(如下图红外显微镜下，dbtrg 细胞被支原体感染24小时候的形态变化)。
图 5.细胞系中支原体污染后细胞形态的变化[4]
支原体的污染可以通过专项检测，例如 pcr 或 dna 荧光染色来检测这类污染。
图 6.细胞系中支原体状态的 pcr 分析[5]
mce小贴士：
支原体污染细胞后，由于支原体体积很小，无法通过过滤的办法去除。如果不是极其难得的细胞，建议还是扔了吧。如果还想救一救，需要注意的是支原体没有细胞壁，因此对作用于细胞壁合成的抗生素是不敏感的。四环素类和大环内酯类抗生素对支原体有很好的抑制活性。
支原体清除试剂 bm-cyclin 有效抑制和清除在细胞培养中广泛存在的支原体污染，包括口腔支原体 mycoplasma orale、精氨酸支原体 mycoplasma arginini、猪鼻支原体 mycoplasma hyorhinis 等，从而挽救受到污染的珍贵细胞。
介绍完细胞培养常见污染种类之后，大家是不是有了一个初步概念了呢？但是，还有一种情况，从 “照骗” 来看， 妥妥的药物析出。
药物结晶析出
由于很多小分子水溶性不好，常用有机溶剂，如 dmso 配制母液，再稀释到培养基孵育细胞。稀释的过程中由于产品溶解性、温度、浓度等因素的影响，很容易出现药物析出，在显微镜下观察：一般会呈现出针状，雪花状或者点状结晶。有些童鞋就一不小心误认为是真菌菌丝了。图 7. 小分子药物在培养基中结晶析出
mce小贴士：
为避免药物析出，稀释前，可将母液和培养基 37℃ 预热，避免温度低造成严重析出。若稀释过程中出现化合物析出的情况， 可采用超声加热的方法使其复溶。
现在大家是不是能很好的区分药物析出和细胞污染及其种类了呢？以后遇到镜下观察有 “污染”，不要直接 “弃疗”，先判断一下是否为药物析出，兴许还有救~
相关产品
支原体清除试剂 bm-cyclin
主要成分为延胡索酸泰妙菌素 (tiamulin fumarate) 和盐酸米诺环素 (minocycline hydrochloride)，可在不影响细胞状态的前提下，有效抑制和清除在细胞培养中广泛存在的支原体污染，对于常见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用。
青霉/链霉素双抗溶液
已过滤除菌，可直接用于细胞培养的双抗溶液。产品添加到细胞培养液中， 可有 效抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，从而有效控制细胞污染。青霉素-链霉素溶液 (100×) 中，含有青霉素 g 钠盐 10 ku/ml，硫酸链霉素 10 mg/ml。
两性霉素 b 无菌溶液
一种多烯类抗真菌抗生素， 破坏真菌正常代谢并引起死亡，从而用于抑制真菌和酵母的污染。
庆大霉素无菌溶液
庆大霉素通过与细菌核糖 体 30s 亚基结合阻断细菌蛋白质的合成，可有效抑制多数革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌的生长。 细胞培养液中，庆大霉素的推荐工作浓度为 0.5-50 μg/ml。
抗生素-抗真菌素溶液
含青霉素 (10 ku/ml)、链霉素 (10 mg/ml)、两性霉素 b (25 μg/ml)。青霉素-链霉素可有效抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，两性霉素 b 可用于抑制真菌、酵母的污染。
潮霉素 b 无菌溶液
氨基糖苷类抗生素，主要通过干扰 70 s 核糖体易位和诱导对 mrna 模板的错读而抑制细胞蛋白质的正常合成，从而导致细菌、真菌和哺乳动物细胞死亡。
mce的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务
参考文献
[1]fotheringham s, levanon k, drapkin r. ex vivo culture of primary human fallopian tube epithelial cells. j vis exp. 2011 may 9;(51):2728.
[2]selcen çelik-uzuner, uğur uzuner. an extensive method for maintenance of sterility in mammalian cell culture laboratory routine. challenges 2017, 8(2), 26
[3]raymond w nims, paul j price. et al. best practices for detecting and mitigating the risk of cell culture contaminants . 2017 dec;53(10):872-879.
[4]katia wehbe , marzia vezzalini, gianfelice cinque. detection of mycoplasma in contaminated mammalian cell culture using ftir microspectroscopy. anal bioanal chem. 2018 may;410(12):3003-3016.
[5]cord c uphoff , hans g drexler. detecting mycoplasma contamination in cell cultures by polymerase chain reaction. methods mol med. 2004;88:319-26.
了解下图尔克抗冲击能力达200 G的线性位移传感器
简析颗粒称重包装机组成结构及工作过程
蒸汽杀菌锅设备停用时的封存和保养方法
硬轨立式加工中心有什么特点
厂一次性医用 医用防护 环氧乙烷成分含量检测成套仪器设备
细胞实验 | 细胞污染还是药物析出？-MedChemExpress
三相高压风机是一种用于提供高压气体的设备
智能涡街流量计常见故障以及5大维修方法
水利控制阀阀密封方法有哪些
真空油炸机的基本结构要素有哪些
怎样使用接触角测量仪
日本midori绿测器电位器LP-10FBS-3
陕西承试三级资质设备清单|陕西承装修试三级资质设备选型指南
天津市西青区大寺污水处理厂TOT项目公开招标公告
力士乐 二位三通和二位四通方向座阀 M-.SED6
喷嘴在西安凯驰高压清洗机中所起到的重要作用啊
标准砝码,标准砝码厂家,砝码在技术方面的要求
造纸厂压光设备降温器
自动感应门风淋室的维护保养方法有哪些？这十项要掌握住！
北京喷砂试验箱控制系统