牛痘病毒加帽酶 (10 KU/mL)说明书
牛痘病毒加帽酶 (10 ku/ml)说明书
产品描述
真核生物中mrna经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mrna的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由d1和d12两个亚基组成，兼具rna三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构（m7gppp）连接到rna的5'末端（m7gppp5'n）。牛痘病毒加帽酶，在合适浓度的加帽缓冲液（capping buffer），鸟苷三磷酸（gtp），s-腺苷甲硫氨酸（sam）等存在条件下，能够在一个小时之内对rna进行加帽，并且保证正确的方向。
本品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mrna的加帽反应或mrna的5'末端标记反应。
产品组分
组分名称
产品编码/规格
78mrna-1105a（500 u）
78mrna-1105b（2000 u）
78mrna-1105c（10000 u）
10×capping buffer
150 ul
500 ul
1.25 ml×2
sam(32mm)
50 ul
200 ul
1 ml
rnase free water
1ml
1ml
1mlx3
vaccinia virus capping enzyme (10 u/μl)
50 ul
200 ul
1 ml
产品性质
来源（source）
携带牛痘病毒加帽酶基因的e. coli
最适温度（optimum temperature）
37℃
储存缓冲液（storage buffer）
20 mm tris-hcl ph 8.0，100 mm nacl，1 mm dtt，0.1 mm edta，0.1% triton x-100，50%甘油
活性单位定义（unit definition）
37℃条件下，1小时内将10 pmol gtp（α- 32p）掺入到一条含80个核苷酸（80 nt）转录产物上所需要的酶量，即为1个单位。
产品应用【 加帽反应 】适用于10 μg rna（≥100 nt）的加帽反应，反应体系20 μl，且可根据实验需要放大。1. 取10 μg rna，用rnase free water将适量rna稀释至15 μl；2. 将rna置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃反应30 min；5. rna加帽完成，可进行后续实验。
组分 体积
denatured rna 15 ul
10×capping reaction buffer 2 ul
gtp (10 mm) 1 ul
sam (2 mm) 1 ul
vaccinia capping enzyme (10 u/μl) 1 ul
total volume 20ul
【 5′ 末端标记反应 】本步骤适用于 5′末端带有三磷酸的rna标记，且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中rna与gtp摩尔浓度比以及rna样本中gtp含量影响。1. 用rnase free water将适量rna稀释至14 μl；2. 将rna置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃孵育30 min；5. rna 5′末端标记完成，可进行后续实验。
组分 体积
denatured rna 14 ul
10×capping reaction buffer 2 ul
gtp mix 2 ul
sam (2 mm) 1 ul
vaccinia capping enzyme (10 u/μl) 1 ul
total volume 20 ul
*注：gtp mix为gtp和少量标记物，gtp储液应稀释为反应体系中mrna摩尔浓度的1~3倍。 注意事项：（1）用于加帽反应的rna在使用前应进行纯化并溶解于rnase free water 。溶液中不能含有edta和盐。（2）加帽酶反应前加热rna可以去除转录产物5′的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂，可将加热时间延长至10 min。（3）如果转录产物的5′端结构复杂，为提高加帽效率可将反应时间延长至120 min。（4）sam在室温下会逐渐降解，sam降解会导致n 7 甲基化效率降低，会进一步导致加帽失败，因此需始终放置在冰上。此外，也可以通过体系优化适当提高用量以保证加帽反应顺利进行。 其他用途可参考上述用途或相关文献资料进行实验
运输和保存方法
干冰运输。-20 ºc保存，避免反复冻融，有效期1年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
2. 所提取的rna需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬；
3. 在加入酶之前需要对rna溶液进行加热以去除5'末端的二级结构；
4. 对于已知5'末端结构的rna，可以延长反应时间至60分钟，提高加帽效率；
5. 5'末端标记反应体系中，gtp储液应稀释为反应体系中mrna摩尔浓度的1-3倍。
货号 品名 规格 品牌
78mrna-1105a 牛痘病毒加帽酶 (10 ku/ml) 500 u biohub
78mrna-1105b 牛痘病毒加帽酶 (10 ku/ml) 2000 u biohub
78mrna-1105c 牛痘病毒加帽酶 (10 ku/ml) 10000 u biohub
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产品描述
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本品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mrna的加帽反应或mrna的5'末端标记反应。
产品组分
组分名称
产品编码/规格
78mrna-1105a（500 u）
78mrna-1105b（2000 u）
78mrna-1105c（10000 u）
10×capping buffer
150 ul
500 ul
1.25 ml×2
sam(32mm)
50 ul
200 ul
1 ml
rnase free water
1ml
1ml
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200 ul
1 ml
产品性质
来源（source）
携带牛痘病毒加帽酶基因的e. coli
最适温度（optimum temperature）
37℃
储存缓冲液（storage buffer）
20 mm tris-hcl ph 8.0，100 mm nacl，1 mm dtt，0.1 mm edta，0.1% triton x-100，50%甘油
活性单位定义（unit definition）
37℃条件下，1小时内将10 pmol gtp（α- 32p）掺入到一条含80个核苷酸（80 nt）转录产物上所需要的酶量，即为1个单位。
产品应用【 加帽反应 】适用于10 μg rna（≥100 nt）的加帽反应，反应体系20 μl，且可根据实验需要放大。1. 取10 μg rna，用rnase free water将适量rna稀释至15 μl；2. 将rna置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃反应30 min；5. rna加帽完成，可进行后续实验。
组分 体积
denatured rna 15 ul
10×capping reaction buffer 2 ul
gtp (10 mm) 1 ul
sam (2 mm) 1 ul
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total volume 20ul
【 5′ 末端标记反应 】本步骤适用于 5′末端带有三磷酸的rna标记，且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中rna与gtp摩尔浓度比以及rna样本中gtp含量影响。1. 用rnase free water将适量rna稀释至14 μl；2. 将rna置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃孵育30 min；5. rna 5′末端标记完成，可进行后续实验。
组分 体积
denatured rna 14 ul
10×capping reaction buffer 2 ul
gtp mix 2 ul
sam (2 mm) 1 ul
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total volume 20 ul
*注：gtp mix为gtp和少量标记物，gtp储液应稀释为反应体系中mrna摩尔浓度的1~3倍。 注意事项：（1）用于加帽反应的rna在使用前应进行纯化并溶解于rnase free water 。溶液中不能含有edta和盐。（2）加帽酶反应前加热rna可以去除转录产物5′的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂，可将加热时间延长至10 min。（3）如果转录产物的5′端结构复杂，为提高加帽效率可将反应时间延长至120 min。（4）sam在室温下会逐渐降解，sam降解会导致n 7 甲基化效率降低，会进一步导致加帽失败，因此需始终放置在冰上。此外，也可以通过体系优化适当提高用量以保证加帽反应顺利进行。 其他用途可参考上述用途或相关文献资料进行实验
运输和保存方法
干冰运输。-20 ºc保存，避免反复冻融，有效期1年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
2. 所提取的rna需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬；
3. 在加入酶之前需要对rna溶液进行加热以去除5'末端的二级结构；
4. 对于已知5'末端结构的rna，可以延长反应时间至60分钟，提高加帽效率；
5. 5'末端标记反应体系中，gtp储液应稀释为反应体系中mrna摩尔浓度的1-3倍。
货号 品名 规格 品牌
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78mrna-1105b 牛痘病毒加帽酶 (10 ku/ml) 2000 u biohub
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