流式荧光法不仅能高通量检测抗原,还能高通量检测核酸。 比如说常见的项目hpv分型,就非常合适用流式荧光法检测。然而如果仅仅只靠核酸杂交来获得信号,很难达到理想的灵敏度(虽然是悬浮芯片,但也是固液相反应效率肯定不如液液反应效率)。因此悬浮芯片会采用先扩增,再杂交的方法来放大信号,提高检测的灵敏度。为什么不在球上直接做扩增反应了。这涉及到了荧光编码微球是否耐热的问题。为了考察碧芯生物beadstar-mplex®磁性荧光编码微球是否耐热,我们做了一下研究工作。
碧芯生物的beadstar-mplex®磁性荧光编码微球能不能做杂交?
可以,在95度 3分钟,48度1小时的杂交条件下,能获得较好的荧光信号(条件还在优化中,欢迎咨询)
能不能直接再球上扩增,碧芯生物做了两个尝试?
1 等温扩增。在球上直接进行滚环扩增(rca, 文章已发表,doi.org/10.1016/j.cclet.2023.108141)和重组酶介导链替换核酸扩增技术(raa,文章在投)
2 pcr反应。目前市面上多数的荧光编码微球都难以耐受pcr的热循环,因此很少见到有直接在磁性荧光编码微球上进行pcr再流式高通量分析核酸分子的产品。为了填补这一块的空白,碧芯生物科技从我们在售的6微米羧基修饰的磁性荧光编码微球中筛选出由23种耐95度的磁性荧光编码微球的阵列,供需要在微球表面进行pcr反应的用户选择。图1为23群微球的阵列)
图1:左图为23群磁性荧光编码微球未pcr的流式图;右图为23群微球经过一个pcr流程后的流式图
综上所述,碧芯生物beadstar-mplex®磁性荧光编码微球有着的热稳定性,不管您是pcr完了做杂交,还是直接在球上pcr, 碧芯生物beadstar-mplex®磁性荧光编码微球都可以帮您建立稳定的检测体系。
pcr热循环程序:
温度(℃)
时间(s)
循环数(cycle)
94
180
1
94
30
31
58
30
72
30
72
300
1
4
holding
1
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