天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)的参考范围

天门-冬氨酸氨基转移酶(ast)检测试剂盒(赖氏微板法)的参考范围
产品简介:
转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶,天门-冬氨酸氨基转移酶(ast)旧称谷草转氨酶(got)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏,以心肌含量最高,肝脏次之,ast 能够催化天门-冬氨酸和 a-酮戊二酸的氨基转移作用,形成谷-氨酸和草酰乙酸。天门-冬氨酸氨基转移酶(ast)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是 ast 催化天门-冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,其反应公式如下:
l-天门-冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+l-谷-氨酸
二硝基苯肼与α-酮酸反应生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下二硝基苯腙的吸收光谱有差异,通过酶标仪检测在 500-520nm 处差异最大,以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量,进而计算酶的活性。100t 该检测试剂盒可检测 50 个样品(不含标准品),该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1、蒸馏水或去离子水
2、离心管、水浴锅或恒温箱
3、96 孔板、酶标仪
操作步骤(仅供参考):
1、准备样品:
①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃
保存1 个月有效,用于 ast/got 的检测。
②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃保存 1 个月
有效,用于ast/got 的检测。
③(选做)样品准备完毕后可以用 bca 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计
算单位蛋白重量组织或细胞内的ast/got 含量。
2、配制 ast 显色基液(1×):取 ast 显色基液(5×)一份加入蒸馏水 4 份稀释即可使用。
3、制作 ast 标准曲线:取丙酮酸标准 1 支,准确加入丙酮酸标准稀释液 1ml,充分混匀,即配制成丙酮酸标准(100mmol/l),4℃保存备用。临用前,取适量的丙酮酸标准 (100mmol/l),按丙酮酸标准(100mmol/l):丙酮酸标准稀释液=1:49 的比例混合,即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/l),按下表制备标准曲线。最好设定平行检测孔,求平均值。
4、ast 酶促反应:按照下表设置对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免
产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
5、ast 测定:混匀,室温放置 5min,以蒸馏水调零,酶标仪 505nm 处测定对照孔、测定孔的吸光度(即为a对照、a测定)。
计算:以标准活力单位(24、61、114、190)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标
准曲线,测定孔的吸光度减去对照孔的吸光度的差值(即a测定-a对照),从标准曲线查得ast活力单位。
参考范围:成年健康人血清ast:8~28 卡门单位/ml
注意事项:
1、 二硝基苯肼显色液溶解以后,如果仍然有结晶析出,应弃用。
2、 ast 显色基液(5×)有一定腐蚀性,请小心操作。
3、 ast assay buffer 使用前应 37℃提前孵育 5min。
4、 由于赖氏法的特点,在绘制标准曲线时每个点最好做 3 孔的重复测定,求出各标准管的吸光度均值,减去“0号管吸光度均值后,对照赖氏单位绘制标准曲线。
5、 血清中 ast 活性在室温可以保存 2 天,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 个月。
6、 成批样本测定时,一般无需每份样本都做自身血清对照,以试剂空白代替即可。
7、 对于超过正常范围的血清样本,应该进行复测,复测时每份样本都应做自身血清对照。
8、 严重黄疸、脂血或溶血的血清,可能会引起测定孔的吸光度增高,因此检测该类样本时应做自身血清标本对照。
9、 当样本的酶活力大于 190 卡门单位时,应将样本进行 5~10 倍稀释后再行测定。
10、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6 个月有效。4℃运输,4℃保存。
天门-冬氨酸氨基转移酶(ast)检测试剂盒(赖氏微板法)的参考范围
关键词:酶标仪 浓度计 水浴锅 恒温箱

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