溶酶体荧光探针—专题
溶酶体
溶酶体为单层膜蛋白包围的内含一系列酸性水解酶的小体。溶酶体中含有多种酶，如糖苷酶、酸性磷酸酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶等等，是物质代谢的场所。
弱碱性胺选择性聚集在胞内低ph值的小室中，可用于研究溶酶体的生物合成和发病机理。其中的就是damp，它不发荧光，需要和抗dnp的抗体共同使用，来观察染色模式。中性红、吖啶橙等荧光探针也常用于酸性细胞器的染色，不过它们缺乏特异性。
lysotracker探针就是invitrogen开发的向酸性荧光探针，用于标记和追踪活细胞中的酸性细胞器。这些探针有几个重要的特征：对酸性细胞器的高选择性，在纳摩尔浓度下能对活细胞有效标记。而且，lysotracker探针有几种不同的颜色，适合多色标记。
lysotracker探针是细胞膜通透性的，一般聚集在球形的细胞器中。研究人员发现探针在极低浓度（～50 nm）下选择性最佳。此外，较大的酸性细胞器在lysotracker red dnd-99染色后，经过甲醛固定仍保留其染色模式。
对于那些想研究溶酶体生物发生动力学的研究人员来说，lysosensor探针可谓量身定做。lysosensor染料是向酸性的探针，由于质子化作用聚集在酸性细胞器中。质子化也缓解了染料的荧光淬灭，使荧光强度增加。因此，lysosensor在酸化的环境中表现出ph依赖的荧光强度增加，而lysotracker探针的荧光则没有明显变化。
invitrogen提供了5种lysosensor试剂，pka不同，颜色各异。lysosensor blue dnd-167和lysosensor green dnd-189的pka值很低，处于酸性环境中才会发出荧光，而lysosensor green dnd-153在中性ph下就发出很强的荧光。lysosensor yellow/blue dnd-160很特别，具有双激发和双发射峰，是ph依赖的。在酸性细胞器中，它主要发黄色荧光，而在弱酸性细胞器中，荧光则为蓝色。lysosensor yellow/blue dnd-160曾与fluo-3 am共用，来同时测量兔胃腺中h+和ca2+，以确定类和camp依赖通路激活后胃酸分泌的动力学。
除了上面这些传统的荧光探针，invitrogen的organelle lights?荧光蛋白也是一个不错的选择。organelle lights是即用型的荧光蛋白载体，融合了信号肽，能将表达的荧光蛋白定位到亚细胞器中，如核、质膜、内质网、高尔基体和过氧化物酶体等等。颜色有青、绿、橙、红几种。它通过改造的可用于哺乳动物细胞的杆状病毒（bacmam virus）将荧光蛋白导入胞内，不仅安全，而且适合多种细胞类型，包括原代细胞和神经细胞。你只需要将试剂加到细胞中就行了，既不需要转染，也不需要对细胞做任何处理，用起来相当方便。
相关产品：
warbio货号
产品名称
ex/em
样本类型
重要特性
lx3032
lysotracker green dnd-26溶酶体绿色荧光探针
73/422
活细胞
可被活细胞极快速地吸收；加入染料后1至5分钟即可达到最佳成像效果
lx4032
lysotracker red dnd-99溶酶体红色荧光探针
577/590
活细胞
染料可快速导入，只需纳摩尔级浓度，对酸性细胞器具有高选择性，几乎不对线粒体染色，可用于活细胞中酸性细胞器的标记和追踪
lx3232
lysosensorgreen dnd-189溶酶体绿色荧光探针
443/505
活细胞
通过质子化作用在酸性细胞器内累积，质子化作用还可解除染料的荧光淬灭性
lx4232
lysosensor yellow/blue dnd-160溶酶体黄/蓝色荧光探针
329/440
活细胞
lysosensor™染料为活细胞染料，在ph7时无荧光，酸化后，荧光强度的增加具有ph依赖性
lx5232
lysosensor™blue dnd-167溶酶体蓝色荧光探针
373/425
活细胞
lysosensor™染料为活细胞染料，在ph7时无荧光，酸化后，荧光强度的增加具有ph依赖性
注：探针标记细胞后，只能用荧光显微镜观察，而不能用流式或荧光酶标仪检测，因为在总细胞荧光中溶酶体荧光只占非常小的比例。
关键词：荧光显微镜 荧光酶标仪
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lysotracker探针是细胞膜通透性的，一般聚集在球形的细胞器中。研究人员发现探针在极低浓度（～50 nm）下选择性最佳。此外，较大的酸性细胞器在lysotracker red dnd-99染色后，经过甲醛固定仍保留其染色模式。
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注：探针标记细胞后，只能用荧光显微镜观察，而不能用流式或荧光酶标仪检测，因为在总细胞荧光中溶酶体荧光只占非常小的比例。
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