反相色谱柱使用维护注意事项分析
反相色谱柱是应用广泛的色谱柱类型， 反相色谱柱键合相主要包括：c18、c8、c4、phenyl、aq等。对于这些反相色谱柱，我们在使用及维护的时候要注意：
1、在条件允许情况下，在使用前对新色谱柱按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。
2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。
3、样品
将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱，则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物，使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂（例如，流动相为水，样品溶剂为甲醇），为达到较好峰形，需要降低进样量（以250x4.6mm规格为例，小于10μl）。
4、流动相
所有流动相，特别是含有缓冲盐的流动相，当日实验当日配制；如果使用了前日配制的流动相，请确保流动相ph值没有变化，并确保流动相没有长菌。 流动相的ph值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱尽量在ph2~8范围内使用。请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水（>95%）作为流动相，可能会造成保留时间的不稳定或者色谱柱键合相的损害。如果使用高比例水或者100%水相为流动相，建议使用亲水柱。
5、色谱柱平衡
在进行分析之前，请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱，以使色谱柱达到平衡。
色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算：
v=0.68πr2
v为色谱柱柱体积（ml），r为色谱柱内径（cm），l为色谱柱长度（cm）。
6、色谱柱保护
对于“脏”的样品以及组分未知的样品，请尽量使用在线滤器或保护柱，如果可能，使用spe小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。
7、色谱柱清洗
在储存色谱柱之前，请使用至少20倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱（去除缓冲盐），再用更强的溶剂冲洗色谱柱（去除强保留成分，反相色谱通常使用甲醇或乙腈），然后使用合适的溶剂储存色谱柱。
8、 色谱柱保存
反相色谱柱，保存溶剂通常是含至少30%有机相的水溶液，也可在常规清洗后直接保存在有机相中。
如果需要长时间储藏，则需要使用较高比例的有机相（有机相比例至少大于50%）。
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3、样品
将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱，则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物，使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂（例如，流动相为水，样品溶剂为甲醇），为达到较好峰形，需要降低进样量（以250x4.6mm规格为例，小于10μl）。
4、流动相
所有流动相，特别是含有缓冲盐的流动相，当日实验当日配制；如果使用了前日配制的流动相，请确保流动相ph值没有变化，并确保流动相没有长菌。 流动相的ph值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱尽量在ph2~8范围内使用。请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水（>95%）作为流动相，可能会造成保留时间的不稳定或者色谱柱键合相的损害。如果使用高比例水或者100%水相为流动相，建议使用亲水柱。
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色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算：
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7、色谱柱清洗
在储存色谱柱之前，请使用至少20倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱（去除缓冲盐），再用更强的溶剂冲洗色谱柱（去除强保留成分，反相色谱通常使用甲醇或乙腈），然后使用合适的溶剂储存色谱柱。
8、 色谱柱保存
反相色谱柱，保存溶剂通常是含至少30%有机相的水溶液，也可在常规清洗后直接保存在有机相中。
如果需要长时间储藏，则需要使用较高比例的有机相（有机相比例至少大于50%）。
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