液相色谱仪新技术：微柱液相色谱及*系统

微柱液相色谱仪技术经历了数十年的发展，从早期的使用不锈钢管的微孔填充柱，发展到使用熔融硅胶毛细管的毛细管填充柱。进入20世纪80年代后期，随着生命科学研究、临床医学研究、新型**研制、生物工程技术的发展、对产品质量控制和环境监测指标的升，了大量组成复杂样品的分析任务。 为此必须具有效分离能力和灵敏度检测能力的全新分析方法，并用于微量和痕量组分的分离和检测。 纳米（标度）液相色谱技术和超压液相色谱技术正是适应上述分析要求，先后于20世纪80年代末期和90年代初期先后提出。他们突破了常规液相色谱仪理论的约束，采用粒径约为1.0μm的粒子填充色谱柱。在实验装置上采用当代的新技术，用微流路处理器纳升数量微小、稳定的流动相流量，用微芯片制作技术在硅晶片上蚀刻出纳米尺寸的色谱柱管，制造了填充压力达410mpa（psi）的压*和耐压1030mpa（psi）的压进样阀，实现了前人从未实践过的毛细管液相色谱分离技术。创建了理论塔板数至20~40万块/m的柱效，完成了组成复杂生物样品的分离，还实现了与ms的联用。从这些新技术的进展，可充分看到色谱工作者的创造能力。 用于微柱液相色谱仪分析的压*，其输出流量应当准确，并有良好的重复性。由于输出流量较小，早期曾使用气动放大泵和螺杆*，后经改造常规往复式柱塞泵，使其也可输出低流量流动相。 现多采用小型螺杆*和往复式柱塞泵。往复式柱塞泵由于螺杆*，它具有对大的柱反压的补偿能力，快的流路平衡和稳定性，并可用于梯度洗脱。由于液流的混合有定的困难，在低流速下柱加压是个耗费时间的过程，若在梯度洗脱中使用螺杆*，会明显的增加梯度延迟。 当对微柱进行元、三元、四元梯度洗脱时，使用低压梯度仍是经济的方法，此时应使用精密时间比例电磁阀。此阀能准确控制每种溶剂的比例，确保不存在渗漏和粘结，使每种低流量溶剂在小体积混合器中*混合。当使用压梯度洗脱时也必须使用小体积的混合器，为保证的混合效率，混合器也可使用个很小的填充柱。对内径1.0mm、长200~300mm的微柱，其柱体积约为100~150μl；对内径0.5mm、长250mm的微柱，其柱体积已小至30μl。我们由此可知，微柱液相色谱仪梯度洗脱中所用混合器的体积要远小于柱体积，并要具有很的混合效率，这在仪器制作商的难度很大。当然，由于液相色谱仪厂的技术和各方面服务是不尽相同的，要想仪器质量、使用寿命达到长，那么选择比较专业的厂是异常重要的。
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