酶联免疫吸附法（ELISA）操作步骤
elisa检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中为广泛为灵敏的技术手段。下面小编简单介绍一下酶联免疫吸附法（elisa）操作步骤。详细步骤如下：
1.用靶蛋白（稀释于50 mm碳酸盐缓冲液ph 9.0）包被反应板。浓度应该做滴度来获得。但对于纯化的抗原在1μg／ml浓度，每孔50 μl一般情况下足够。用薄膜覆盖4oc孵育过夜。
2.移去抗原溶液。加入封闭液200μl／孔（pbs containing 1% bsaａnd 0.02% azide）以封闭非特异蛋白的结合。室温下卵育1–2小时，或4oc过夜。
3.移去封闭液。用pbs漂洗一次。湿润的反应板（孔）在密封塑料袋中4oc下可保存4周。使用移去多余液体。
4.加入用封闭液稀释的检测抗体和对照50 μl／每孔。抗体可以做一个系列稀释以确定一个滴度或者用以曾经用于筛选试验的浓度，以及根据抗原含量滴度。室温下孵育一小时。
5.用含0.05%tween-20（tween-20: sc-29113）pbs冲洗培养板3次。吸去多余的液体。
6.每孔加入50μl用封闭缓冲液稀释1:100-1:1000倍的碱性磷酸酶标记的二抗 （wb用常规二抗）抗体浓度应通过滴度来获得。室温下孵育1小时。
7.移去孔内液体。用含0.005%twenn-20pbs冲洗3次并风干。
8.用二乙醇胺缓冲液 （10 mm diethanolamine, 0.5 mm mgcl2（ph 9.5） 冲洗培养孔并移去液体。
9.用二乙醇胺缓冲液（diethanolamine buffer）稀释底物（pnpp, sc-3720），终浓度为1mg/ml。每孔加入50μl。反应10–20分钟或阳性对照的405／490吸光度约为1.0。加入50μl0.1medta（edta: sc-29092），ph 7.5。酶标仪读取405／490 nm光吸收值。
上海研域生物一直致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供业的科研试剂和完善的技术服务，满足生物化学、分子生物学 、细胞生物学、免疫学等生物科技实验需求。优秀的产品和完善的服务使上海研域在行业内获得了良好的口碑。
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2.移去抗原溶液。加入封闭液200μl／孔（pbs containing 1% bsaａnd 0.02% azide）以封闭非特异蛋白的结合。室温下卵育1–2小时，或4oc过夜。
3.移去封闭液。用pbs漂洗一次。湿润的反应板（孔）在密封塑料袋中4oc下可保存4周。使用移去多余液体。
4.加入用封闭液稀释的检测抗体和对照50 μl／每孔。抗体可以做一个系列稀释以确定一个滴度或者用以曾经用于筛选试验的浓度，以及根据抗原含量滴度。室温下孵育一小时。
5.用含0.05%tween-20（tween-20: sc-29113）pbs冲洗培养板3次。吸去多余的液体。
6.每孔加入50μl用封闭缓冲液稀释1:100-1:1000倍的碱性磷酸酶标记的二抗 （wb用常规二抗）抗体浓度应通过滴度来获得。室温下孵育1小时。
7.移去孔内液体。用含0.005%twenn-20pbs冲洗3次并风干。
8.用二乙醇胺缓冲液 （10 mm diethanolamine, 0.5 mm mgcl2（ph 9.5） 冲洗培养孔并移去液体。
9.用二乙醇胺缓冲液（diethanolamine buffer）稀释底物（pnpp, sc-3720），终浓度为1mg/ml。每孔加入50μl。反应10–20分钟或阳性对照的405／490吸光度约为1.0。加入50μl0.1medta（edta: sc-29092），ph 7.5。酶标仪读取405／490 nm光吸收值。
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