丁基疏水色谱柱在使用时有哪些需要注意的呢？
丁基疏水色谱柱是一款以粒径为2.5 um的，丁基键合无孔型亲水性聚合物基质为填充剂的疏水作用色谱柱。适用于蛋白质、单抗、酶等生物大分子的分离分析。丁基疏水色谱柱的使用注意事项：
1、使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓冲盐和污染物。
2、取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3、将丁基疏水色谱柱入口端连接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上有箭头标明正确流向。
4、在0.1ml/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2分钟内将流速升至0.5ml/min。
5、当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上（这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。
6、重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。
7、参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。
8、测试丁基疏水色谱柱柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物，请厂家部门寻求支持，使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾，提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态，需要进行故障排查。当使用2.1mm内径色谱柱时，建议优化系统以减少谱带展宽，包括：使用检测器微量流通池，减少进样器loop环体积，使用较小内径（如0.005''或0.12mm）的系统管路。并确保管路与丁基疏水色谱柱连接恰当、无死体积。当使用小颗粒填料（如2.5μm）短柱进行快速分离时，需要考虑以下因素：
1、确保管路丁基疏水色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；
2、提高采样频率至10点/秒以上；
3、较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到*色谱效率所需的线速度较高，请根据所用lc系统的实际情况调节流速；
4、可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40?c。使用杂化颗粒反相色谱柱时，可使用45?c或更高。
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5、当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上（这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。
6、重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。
7、参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。
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1、确保管路丁基疏水色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；
2、提高采样频率至10点/秒以上；
3、较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到*色谱效率所需的线速度较高，请根据所用lc系统的实际情况调节流速；
4、可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40?c。使用杂化颗粒反相色谱柱时，可使用45?c或更高。
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