微生物法测定泛酸的方法步骤

泛酸是辅酶a(coa)和酰基载体蛋白(acp)生物合成的重要前体物质,参与人体中类固醇、褪黑激素、抗体和亚铁血红素的合成,是维持生命正常生理机能的必需小分子有机物,也是婴幼儿乳粉中重要的营养物质。
目前的两种方法——微生物法和液相色谱法都可以用于检测奶粉等婴幼儿食品中的泛酸,结果具有可比性。微生物法法测定泛酸含量灵敏度高,其标准曲线相关系数、回收率和相对标准偏差方面,检测结果都较好。而液相色谱法的检测速度较慢、成本较高,所以采用微生物法进行大量样本的测定,被美国aoac所*,也是我国标准检验方法的仲裁法。
但该方法操作步骤较多,微生物生长的不确定性强也会影响结果。注意这些可能存在的影响因素,可以保证测量结果的稳定和准确。有人研究发现,对泛酸检验结果影响zui大的是试样前处理(存在泛酸损失)及稀释(包括容量瓶、吸量管、量筒等玻璃器具的校准和室温对液体体积的影响),其次是标准溶液的配制。另一项研究则发现,是微生物因素引起的吸光度曲线偏离线性影响zui大,因此建议在日常监测中,减少微生物培养环境因素的波动,对培养环境实时更严格的控制。
关于微生物法测泛酸的精密度,有人对14个婴儿配方奶粉的泛酸含量进行了测定,进行了28次相对误差和20次回收率的观察,发现75%的结果相对误差都<10%,回收率有80%在90~110%之间,说明该方法用于检测奶基婴幼儿食品是可行的。
又有研究发现,标准曲线在0~50ng/ml范围内,线性关系较好。同时提出几点注意事项,要注意无菌操作;避免菌种污染;玻璃器皿要严格清洗;必要的话,样本多做几个稀释度的实验;降温过程中,要将试管浸入冷水中,使其迅速降温,避免沉淀和颜色产生;用软件拟合4次泛酸标准曲线。

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