分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量
光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量
一、原理
样品经沉淀蛋白质，除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，通过测定吸光度可与标准进行比较定量。
二、试剂
亚铁***溶液：称取10.6g k4fe(cn)6.3h2o溶于水定容100ml.
乙酸锌溶液：称取11g zn(chcoo)2 .2h2o加1.5ml冰乙酸，溶于水定容50ml。
饱和硼砂溶液：称取5g nab4o7 .10h2o溶于100ml热水中，冷却备用。
20%盐酸：取54ml浓盐酸加水45ml。
0.4%对氨基苯磺酸：称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100ml20%盐酸中。
200ug/ml*标准液：精密称取0.1000g经硅胶干燥24小时的*（gr），加水溶解后，定容500ml。
5.0ug/ml*标准使用液：吸取*标准液5.0ml于500ml容量瓶中用重蒸馏水定容。
三、仪器
电炉电热恒温水浴锅玻棒漏斗铁架台
烧杯（200ml2个，500ml2个，50ml1个）
容量瓶（250ml1个）吸管（2ml,5ml,10ml,50ml各1支）
比色管（50ml10支）
四、操作步骤
1、样品处理
称取3g左右火腿肠于50ml烧杯中，加入饱和硼砂溶液6.3ml，以玻棒搅匀，用70℃左右的重蒸馏水约100ml将其洗入250ml的容量瓶中，置于沸水浴中加热15分钟，取出，一边转动一边加入5ml亚铁***溶液，摇匀，再加入5ml乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。定容，混匀，静置半小时，除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液30ml，收集滤液备用。
2、绘制标准曲线
吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20ml*标准使用液，分别置入7支50ml比色管中，各加入0.4%对氨基苯磺酸2ml,混匀，静置3-5分钟后各加入1.00ml 0.2%盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2cm比色皿，以零管调零，于538nm处测量吸光度，以*含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、样液测定
吸取40ml样品处理液于50ml比色管中，按标准曲线绘制步骤进行，测定吸光度，通过吸光度从标准曲线上查出*的含量（ug）。
五、计算
*的含量(g/kg) =
x ——40ml样品处理液中*的含量（ug）
m ——火腿肠的质量（g）
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一、原理
样品经沉淀蛋白质，除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，通过测定吸光度可与标准进行比较定量。
二、试剂
亚铁***溶液：称取10.6g k4fe(cn)6.3h2o溶于水定容100ml.
乙酸锌溶液：称取11g zn(chcoo)2 .2h2o加1.5ml冰乙酸，溶于水定容50ml。
饱和硼砂溶液：称取5g nab4o7 .10h2o溶于100ml热水中，冷却备用。
20%盐酸：取54ml浓盐酸加水45ml。
0.4%对氨基苯磺酸：称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100ml20%盐酸中。
200ug/ml*标准液：精密称取0.1000g经硅胶干燥24小时的*（gr），加水溶解后，定容500ml。
5.0ug/ml*标准使用液：吸取*标准液5.0ml于500ml容量瓶中用重蒸馏水定容。
三、仪器
电炉电热恒温水浴锅玻棒漏斗铁架台
烧杯（200ml2个，500ml2个，50ml1个）
容量瓶（250ml1个）吸管（2ml,5ml,10ml,50ml各1支）
比色管（50ml10支）
四、操作步骤
1、样品处理
称取3g左右火腿肠于50ml烧杯中，加入饱和硼砂溶液6.3ml，以玻棒搅匀，用70℃左右的重蒸馏水约100ml将其洗入250ml的容量瓶中，置于沸水浴中加热15分钟，取出，一边转动一边加入5ml亚铁***溶液，摇匀，再加入5ml乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。定容，混匀，静置半小时，除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液30ml，收集滤液备用。
2、绘制标准曲线
吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20ml*标准使用液，分别置入7支50ml比色管中，各加入0.4%对氨基苯磺酸2ml,混匀，静置3-5分钟后各加入1.00ml 0.2%盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2cm比色皿，以零管调零，于538nm处测量吸光度，以*含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、样液测定
吸取40ml样品处理液于50ml比色管中，按标准曲线绘制步骤进行，测定吸光度，通过吸光度从标准曲线上查出*的含量（ug）。
五、计算
*的含量(g/kg) =
x ——40ml样品处理液中*的含量（ug）
m ——火腿肠的质量（g）
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