GoldBio D-荧光素钾盐使用说明书

一、goldbio荧光素原液(glss)的制备
1.在分子生物学级h2o中制备15 mg/ml(100x)glss。
a.为了获得最佳结果,应立即使用glss,但可能会将其分离分成小份,在-80°c下储存长达1个月。
2.萤光素酶发光中萤光素底物glss的最终浓度
含量测定应为:150μg/ml(荧光素-k为471μm,荧光素na为468μm)。
二、goldbio萤光素酶测定缓冲液(tmca)的制备
在合并到tmca中之前,将所有试剂作为分子级h2o中的储备溶液进行制备。
1.准备一份500mm的mgcl2(100x)溶液。
a.称取476.05 mg(95.21 g/mol)mgcl2并溶解在10 ml h2o中。
b.溶液可储存在rt。
2.制备25mm coa(100x)溶液。
a.称取191.88 mg(767.53 g/mol)coa并溶解在10 ml h2o中。
b.通过过滤器抽取5-10 ml h2o,制备0.2µm过滤器。
c.通过预湿过滤器对100x coa进行灭菌,并在-20°c下储存。
3.制备15mm atp(100x)溶液。
a.称取82.67 mg(551.14 g/mol)atp并溶解在10 ml h2o中。
b.在-20°c下储存。
4.制备400mm tris-hcl,ph 7.8(4x)缓冲液。
a.称取4.85 g(121.14 g/mol)tris碱并溶解在85 ml h2o中。
b.用1m hcl调节ph至ph 7.8,并用h2o将体积调至100 ml。
5.在室温下准备新鲜的2倍tmca原料。
a.计算实验所需的tmca;将所有组件合并为2倍
工作浓度(在h2o中)(随后在荧光素酶测定中降低到1x)。
示例:对于1 ml tmca(2x):500µl tris-hcl(4x原液)20µl mgcl2(100倍库存)20µl coa(100倍库存)
20µl atp(100倍库存)用h2o将体积调至1 ml。
b.如有必要,您可以在此时加入其他成分(即dtt、edta)。
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