Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒红色荧光光谱及实验方案
cell meter tunel凋亡检测试剂盒红色荧光是美国aat bioquest研发的用于检测细胞凋亡的试剂盒，dna片段化代表晚期细胞凋亡的特征。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案。适用于荧光酶标仪，荧光显微镜或流式细胞仪。百萤生物是aat bioquest的中国代理商，为您提供优质的细胞凋亡检测试剂盒。
光谱：
光谱性质
消光系数： 27500
ex:549 (nm)
em：648
适用仪器
流式细胞仪
ex:488 nm
em：660/20 nm
通道:pe-cy5 通道
荧光显微镜
ex:tritc 滤波片组
em:tritc 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
荧光酶标仪
ex:550 nm
em： 590 - 650nm
cutoff：570 nm
推荐孔板:纯黑色孔板
实验方案
样品实验方案
简要概述
1.用测试化合物准备细胞。
2.与tunel工作溶液在37°c下孵育30分钟至1小时。
3.洗涤细胞。
4.用4％甲醛（可选）固定细胞。
5.用带fitc滤光片的荧光显微镜或带fitc通道的流式细胞仪。读取ex / em = 490/525 nm（截止= 515 nm）处的荧光强度。
溶液配制
工作溶液配制
将0.5μl的100x tunnelyte green（组分a）添加到50μl的反应缓冲液（组分b）中，使总体积为50.5μl的tunel工作溶液。 避光。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定细胞密度。
实验步骤
1.根据您的特定协议，将细胞培养至密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，建议大约1至2 x 106细胞/ ml。 同时，在每种标记条件下，用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意：我们用100 nm-1 µm星形孢菌素处理hela细胞4小时，以诱导细胞凋亡。
2.染色和固色：
2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µl tunel工作溶液。
2.3在37°c下孵育30-60分钟。
2.4除去tunel工作溶液，并用200 µl /孔的pbs洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100ul反应缓冲液（组分b）。
2.6使用ex / em = 550/590-650 nm（cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带tritc滤光片的荧光显微镜或带fl3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选：从步骤5中移出反应缓冲液，并向每个孔中添加100 µl /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2x106细胞/ ml）的4％甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用pbs洗涤细胞2-3次，并用100µl pbs /孔/ 96孔板替换。
2.11使用ex / em = 550/590-650nm（cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带tritc滤光片的荧光显微镜或带fl3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选：用1x hoechst（组分c）在ex / em = 350/460 nm处染色细胞核，以进行图像分析
图1.与未处理的对照相比，用 100 nm 或 1 μm 星形孢菌素 (ss) 处理 4 小时后 hela 细胞中 tunel 反应的荧光图像。细胞与 tunel 工作溶液在 37ºc 下孵育 1 小时。使用具有 tritc 滤光片组的荧光显微镜分析红色荧光信号。荧光标记的 dna 链断裂在 ss 处理的细胞中显示出强烈的荧光染色。
图2.tunel 染色定义的 bm 中凋亡的 pca 细胞。pca细胞被泛细胞角蛋白识别为绿色，tunel信号以红色显示。比例尺，20 微米。资料来源：axl 是 tgf-β2 诱导的骨髓中前列腺癌细胞休眠所必需的，yumoto 等人，《科学报告》，2016 年 11 月。
关键词：荧光酶标仪 荧光显微镜 流式细胞仪 显微镜 酶标仪
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ex:549 (nm)
em：648
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ex:488 nm
em：660/20 nm
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荧光显微镜
ex:tritc 滤波片组
em:tritc 滤波片组
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ex:550 nm
em： 590 - 650nm
cutoff：570 nm
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实验方案
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简要概述
1.用测试化合物准备细胞。
2.与tunel工作溶液在37°c下孵育30分钟至1小时。
3.洗涤细胞。
4.用4％甲醛（可选）固定细胞。
5.用带fitc滤光片的荧光显微镜或带fitc通道的流式细胞仪。读取ex / em = 490/525 nm（截止= 515 nm）处的荧光强度。
溶液配制
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将0.5μl的100x tunnelyte green（组分a）添加到50μl的反应缓冲液（组分b）中，使总体积为50.5μl的tunel工作溶液。 避光。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定细胞密度。
实验步骤
1.根据您的特定协议，将细胞培养至密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，建议大约1至2 x 106细胞/ ml。 同时，在每种标记条件下，用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意：我们用100 nm-1 µm星形孢菌素处理hela细胞4小时，以诱导细胞凋亡。
2.染色和固色：
2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µl tunel工作溶液。
2.3在37°c下孵育30-60分钟。
2.4除去tunel工作溶液，并用200 µl /孔的pbs洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100ul反应缓冲液（组分b）。
2.6使用ex / em = 550/590-650 nm（cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带tritc滤光片的荧光显微镜或带fl3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选：从步骤5中移出反应缓冲液，并向每个孔中添加100 µl /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2x106细胞/ ml）的4％甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
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2.11使用ex / em = 550/590-650nm（cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带tritc滤光片的荧光显微镜或带fl3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
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图1.与未处理的对照相比，用 100 nm 或 1 μm 星形孢菌素 (ss) 处理 4 小时后 hela 细胞中 tunel 反应的荧光图像。细胞与 tunel 工作溶液在 37ºc 下孵育 1 小时。使用具有 tritc 滤光片组的荧光显微镜分析红色荧光信号。荧光标记的 dna 链断裂在 ss 处理的细胞中显示出强烈的荧光染色。
图2.tunel 染色定义的 bm 中凋亡的 pca 细胞。pca细胞被泛细胞角蛋白识别为绿色，tunel信号以红色显示。比例尺，20 微米。资料来源：axl 是 tgf-β2 诱导的骨髓中前列腺癌细胞休眠所必需的，yumoto 等人，《科学报告》，2016 年 11 月。
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