抗*的薄层色谱和含量测定
目的建立抗*的质量标准。方法采用薄层色谱法对**中黄芩、甘草、桔梗进行鉴别；用高效液相色谱法测定制剂中*的含量。采用aichrombond-aq-c18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇-水－磷酸(43∶57∶0.2)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10μl。结果薄层色谱专属性强；*的线性范围为0.0496～0.2976μg,r＝0.9997,平均加样回收率为101.80%,rsd＝1.86%(n＝6)。结论该方法简便、准确,重现性好,可作为抗*的质量控制标准。
【关键词】抗*；*；黄芩；甘草；桔梗；高效液相色谱法
abstract：objectivetoestablishthequalitystandardforkangganmaogranule.methodsradixscutellariae,radixetrhizomeglycyrrhizaeandradixplatycodonisintheprescriptionwereidentifiedbytlc.thecontentofthebaicalinwasdeterminedbyhplc.thecolumnofaichrombond-aq-c18(4.6mm×150mm,5μm)wasused.thephasewasch3oh-h2o-h3po4(43∶57∶0.2),withtheflowof1.0ml/min,thecolumntemperatureof30℃,andpeaksweredetectedat280nm.resultsthecharacteristicofidentificationbytlcwasdistinctandhighlyspecific.thelinearrangeofbaicalinwas0.0496～0.2976μg,r＝0.9997,theaveragerecoverywas101.80%,rsd＝1.86%(n＝6).conclusionthemethodwaseasytooperatewithaccurateresultandgoodreproducibility.itcanbeusedeffectivelyforthequalitycontrolofthepreparation.
keywords：kangganmaogranule；baicalin；radixscutellariae；radixetrhizomeglycyrrhizae；radixplatycodonis；hplc
抗***由金银花、连翘、黄芩等9味药材组成。用于风热感冒,发热恶风,鼻塞**,咽喉肿痛。本试验对方中黄芩、甘草、桔梗进行了鉴别,同时用hplc法测定了制剂中*的含量,建立了可靠、准确、专属性强的质量控制方法。
1仪器与试药
日本岛津lc-10advp高效液相色谱仪,岛津spd-10avp紫外检测器,hw色谱工作站。黄芩药材购自淮安市药材公司(由江苏某公司提供),经南京中医药大学王春根教授进行品种鉴定。*对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用,批号10715-200212)。10批产品由江苏某公司生产并提供(批号分别为050601、050602、050603、050604、050605、050701、50702、050703、050704、050705)。甲醇、乙醇等试剂由上海久亿化学试剂有限公司生产,均为分析纯或色谱纯。
2定性鉴别
2.1黄芩薄层色谱鉴别
取*对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。取本品10g,加甲醇30ml,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml,加热使溶解,趁热滤过,滤液用盐酸调节ph值至1～2,摇匀,80℃保温30min,放冷,离心15min,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液[1]。取除黄芩以外的其它8味药材按**比例制得阴性样品10g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。
2.2甘草薄层色谱鉴别
取甘草对照药材5g,加盐酸1ml及石油醚(60～90℃)25ml,加热回流1h,滤过,滤液挥干,残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解,作为对照药材溶液[2]。取本品15g,加盐酸2ml及石油醚(60～90℃)40ml,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除甘草以外的其它8味药材按**比例制得的阴性样品15g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以石油醚(60～90℃)-甲苯-乙乙酯-冰乙酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%的磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。
2.3桔梗薄层色谱鉴别[3]
取桔梗对照药材5g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液25ml,加热回流1h,放冷,用提取2次,每次20ml,合并液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。取本品15g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液40ml,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除桔梗以外的其它8味药材按**比例制得的阴性样品15g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以-(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。
3含量测定
本方中黄芩用量较大,且其中含有的*化学性质稳定,测定方法简便,故在含量测定时选择*为指标[4]。
3.1色谱条件
aichrombond-aq-c18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2),流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10μl。
3.2对照品溶液的制备
精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的*对照品,加甲醇制成每1ml含0.496mg的溶液,摇匀,作为母液。从中吸取5ml,用甲醇稀释至50ml,制成每毫升含0.0496mg*溶液,备用。
3.3供试品溶液的制备
取10个批号的抗*,每批取2份,研细,每份各取0.2g,精密称定,置具塞三角烧瓶中,精密加入甲醇10ml,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
3.4系统适应性考察
分别精密吸取*对照液和各供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪。理论塔板数以*峰计,不低于2500,此时,*峰与其它相邻峰基线分离,分离度r>1.5,保留时间约为14min。色谱图见图1。
3.5线性关系的考察
分别精密吸取浓度为0.0496mg/ml*对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0ml定容至10ml量瓶中,摇匀,制成4.96、9.92、14.88、19.84、29.76μg/ml的系列溶液。
精密吸取5个不同浓度的对照液各10μl,注入液相色谱仪,各进2针。以浓度c为横坐标,以*平均峰面积y为纵坐标进行线性回归,得回归方程：c＝2×10-4a＋0.7879,r＝0.9997,线性范围为0.0496～0.2976μg。
3.6精密度试验
精密吸取浓度为9.92μg/ml对照品溶液10μl,连续进样5次,测得*峰面积值rsd＝2.48%。
3.7稳定性试验
精密吸取批号为050705的**个供试液10μl,每间隔2h进一针,连续考察10h,结果*峰面积值的rsd＝2.76%,表明在10h内基本稳定。
3.8专属性试验
在与样品测定*相同的条件下,精密吸取黄芩阴性对照液10μl,注入液相色谱仪,连续进3针,阴性无干扰。说明在抗*中,*的专属性较强。
3.9重复性试验
取同一批号(050705)样品0.25g,共6份,精密称定,按样品测定项下的方法测定,测得样品中指标成分*的含量,rsd＝2.12%,结果表明重复性良好。
3.10加样回收率试验
取批号为050705的抗*0.25g,精密称定6份,各精密加入浓度为29.76μg/ml的*对照液2.5ml,分别用与“3.3”项下相同的方法制得供试液。并用与“3.11”项下相同的方法测得样品中指标成分*的含量,结果见表1。表1加样回收率试验结果(略)
3.11样品测定
精密吸取各供试液10μl,注入液相色谱仪,分别进2针。采用标准曲线法定量,根据取样量和稀释度,计算含量,结果见表2。表2样品含量测定结果(略)
由实验结果可知,仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好,符合定量要求。根据以上测定结果,暂定每1g抗*中含黄芩以*(c21h18o11)计,不得少于0.49mg。
4讨论
上述实验中,黄芩、甘草、桔梗的鉴别专属性强,重现性好,操作简便,故正式纳入抗*质量标准中；而荆芥、*的鉴别,因阴性有干扰,专属性不强,故未纳入质量标准中。
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【关键词】抗*；*；黄芩；甘草；桔梗；高效液相色谱法
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2定性鉴别
2.1黄芩薄层色谱鉴别
取*对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。取本品10g,加甲醇30ml,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml,加热使溶解,趁热滤过,滤液用盐酸调节ph值至1～2,摇匀,80℃保温30min,放冷,离心15min,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液[1]。取除黄芩以外的其它8味药材按**比例制得阴性样品10g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
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2.2甘草薄层色谱鉴别
取甘草对照药材5g,加盐酸1ml及石油醚(60～90℃)25ml,加热回流1h,滤过,滤液挥干,残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解,作为对照药材溶液[2]。取本品15g,加盐酸2ml及石油醚(60～90℃)40ml,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除甘草以外的其它8味药材按**比例制得的阴性样品15g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
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2.3桔梗薄层色谱鉴别[3]
取桔梗对照药材5g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液25ml,加热回流1h,放冷,用提取2次,每次20ml,合并液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。取本品15g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液40ml,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除桔梗以外的其它8味药材按**比例制得的阴性样品15g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
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3含量测定
本方中黄芩用量较大,且其中含有的*化学性质稳定,测定方法简便,故在含量测定时选择*为指标[4]。
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3.2对照品溶液的制备
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3.3供试品溶液的制备
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3.4系统适应性考察
分别精密吸取*对照液和各供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪。理论塔板数以*峰计,不低于2500,此时,*峰与其它相邻峰基线分离,分离度r>1.5,保留时间约为14min。色谱图见图1。
3.5线性关系的考察
分别精密吸取浓度为0.0496mg/ml*对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0ml定容至10ml量瓶中,摇匀,制成4.96、9.92、14.88、19.84、29.76μg/ml的系列溶液。
精密吸取5个不同浓度的对照液各10μl,注入液相色谱仪,各进2针。以浓度c为横坐标,以*平均峰面积y为纵坐标进行线性回归,得回归方程：c＝2×10-4a＋0.7879,r＝0.9997,线性范围为0.0496～0.2976μg。
3.6精密度试验
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3.7稳定性试验
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