山梨醇脱氢酶（sorbitol dehydrogenase，SDH）试剂盒说明书微量法
货号： yjs2392 规格：100管/96样
山梨醇脱氢酶（sorbitol dehydrogenase，sdh）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
sdh（ec 1.1.1.14）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。
测定原理：
sdh催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原nad+生成nadh，测定340nm吸光度增加速率可以计算sdh活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100ml×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，
加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂二中加入7.6ml试剂一和11.4ml蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；用不完的试剂4℃保存一周；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本和190μl试剂二，混匀，立即记录340nm
处20s时的吸光值a1和2min20s后的吸光值a2，计算δa=a2-a1。
sdh 活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）sdh 活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/ml）= [δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷v 样÷t=1608×δa
2、组织、细菌或细胞中 sdh 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/mg prot）=[δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷(v 样×cpr)÷t
=1608×δa÷cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/g 鲜重）=[δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷(w× v 样÷v 样总)÷t
=1608×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/104cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(500×v 样÷v 样总)÷t
=3.216×δa
v 反总：反应体系总体积，2×10 -4l；ε：nadh 摩尔消光系数，6.22×103l/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；v 样：加入样本体积，0.01 ml；v 样总：加入提取液体积，1 ml；t：反应时间，2 min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）sdh 活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min /ml）= [δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷v 样÷t=3216×δa
2、组织、细菌或细胞中 sdh 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/mg prot）=[δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷(v 样×cpr)÷t
=3216×δa÷cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min /g 鲜重）=[δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷(w× v 样÷v 样总) ÷t
=3216×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min /104cell）=[δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷(500×v样÷v样总) ÷t
=6.426×δa
v 反总：反应体系总体积，2×10 -4l；ε：nadh 摩尔消光系数，6.22×103l/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；v 样：加入样本体积，0.01 ml；v 样总：加入提取液体积，1 ml；t：反应时间，2 min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验外包及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十余年，是客户您值得信赖的科研合作伙伴!
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实验代做服务：
elisa试剂盒免费代检测
cck8检测
he染色
蛋白相互作用分析
western blot
免疫组化ihc染色
荧光定量pcr
动物模型服务
流式细胞检测
免疫荧光染色
激光共聚焦
dna甲基化实验
石蜡/冰冻切片
透射电镜服务
扫描电镜实验
蛋白双向(2-d)
琼脂糖凝胶电泳
免疫共沉淀
原位杂交（fish）
蛋白质纯化
分子克隆和质粒载体构建服务
组蛋白甲基化磷酸化乙酰化
蛋白双向2d-wb
药理毒理动物实验
番红o固绿染色
明胶酶谱mmp
酶活性检测
动物造模/模型实验服务
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需自备的仪器和用品：
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试剂组成和配制：
提取液：液体 100ml×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，
加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂二中加入7.6ml试剂一和11.4ml蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；用不完的试剂4℃保存一周；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本和190μl试剂二，混匀，立即记录340nm
处20s时的吸光值a1和2min20s后的吸光值a2，计算δa=a2-a1。
sdh 活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）sdh 活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/ml）= [δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷v 样÷t=1608×δa
2、组织、细菌或细胞中 sdh 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/mg prot）=[δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷(v 样×cpr)÷t
=1608×δa÷cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/g 鲜重）=[δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷(w× v 样÷v 样总)÷t
=1608×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min/104cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(500×v 样÷v 样总)÷t
=3.216×δa
v 反总：反应体系总体积，2×10 -4l；ε：nadh 摩尔消光系数，6.22×103l/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；v 样：加入样本体积，0.01 ml；v 样总：加入提取液体积，1 ml；t：反应时间，2 min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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1、血清（浆）sdh 活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
sdh（nmol/min /ml）= [δa×v 反总÷（ε×d）×109]÷v 样÷t=3216×δa
2、组织、细菌或细胞中 sdh 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol nadh定义为一个酶活力单位。
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=6.426×δa
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