NCTC2472细胞传代培养 小鼠纤维肉瘤细胞
细胞：nctc2472细胞
中文名称：小鼠纤维肉瘤细胞
生长特性：贴壁
培养基：dmem-h培养基 血清：10%fbs（gibco胎牛血清）
冻存条件：50%基础培养基、40% fbs、10% dmso
细胞传代：
1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，pbs缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25%yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。
2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。
3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4）：注意培养基ph值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）
h9亚型(aiv-h9)核酸扩增检测 rna提取
样品处理:
1):固体组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆或剪刀剪碎，加入500μl rna提取液a（trizol reagents），研磨或振荡至匀浆状，转移到1.5ml的ep管中，室温放置5min。
培养物、试子等液体标本：将标本充分混匀，取100μ液体标本加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。
2):加入100μl氯仿，用力震荡15s，室温静置5min， 4℃ 13,000rpm离心5min。
3):小心将上层水相转移到干净离心管中，加300 μl 无水乙醇，另加10μl rna提取液b（内含不溶物，使用前室温溶解并充分混匀），充分混匀，13,000rpm离心1min。
4):弃上清，加入500 μl 75%的depc乙醇，充分混匀，13,000rpm离心1min，小心吸去大部分乙醇。
5):将提取管敞口在室温空气中干燥5min待乙醇挥发干净，用20μl depc h2o溶解沉淀。
阴性质控品：取100μl阴性质控品加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。后按2-5操作。
aiv-h9阳性质控品: 直接取3μl 进行pcr扩增。
关键词：培养箱
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细胞传代：
1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，pbs缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25%yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。
2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。
3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4）：注意培养基ph值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
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2):加入100μl氯仿，用力震荡15s，室温静置5min， 4℃ 13,000rpm离心5min。
3):小心将上层水相转移到干净离心管中，加300 μl 无水乙醇，另加10μl rna提取液b（内含不溶物，使用前室温溶解并充分混匀），充分混匀，13,000rpm离心1min。
4):弃上清，加入500 μl 75%的depc乙醇，充分混匀，13,000rpm离心1min，小心吸去大部分乙醇。
5):将提取管敞口在室温空气中干燥5min待乙醇挥发干净，用20μl depc h2o溶解沉淀。
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