解决方案│高性能酶原料助力甲基化单链建库
dna甲基化是潜力的早筛及mrd的标志物，基于ngs的甲基化检测中，重亚硫酸氢盐转化是dna甲基化检测的“金标准”，转化率可达99.5%以上，但重亚硫酸盐处理会导致严重的dna损伤、片段化及解链。此外，一些低质量或严重降解的dna（cfdna、ctdna、ffpe dna、古生菌dna等）中也含有大量的dna单链，采用常规双链建库，文库转化效率较低，测序数据质量差。而单链建库可以大幅提高dna原始分子的利用率，提高文库的复杂性，在低起始量样本的甲基化文库和基因组文库构建中具有显著的优势。
图1. 甲基化单链建库流程图
甲基化单链建库流程甲基化转化：重亚硫酸盐（bisulfite）处理dna，使未甲基化的c转化为u；
变性：双链dna变性为单链dna；
3’接头连接：tdt末端转移酶催化单链dna的3’羟基端加上同聚物尾巴（poly c），e.coli dna ligase 连接3’接头；
二链合成：dna ploymerase i或klenow fragment进行单链dna互补链合成；
5’接头连接：t4 dna ligase 连接5’接头；
文库扩增：耐u高保真dna聚合酶扩增，获取含有完整接头序列的上机文库。
翌圣通过zymeeditor酶改造平台对用于单链建库的全套酶原料进行性能提升及工艺优化，用于单链建库可显著提高文库转化率，助力甲基化检测。
性能展示01不同投入量human gdna单链建库，文库产量更高对不同投入量的human gdna进行亚硫酸盐转化，使用翌圣全套建库酶原料进行单链建库，结果显示使用翌圣酶原料进行单链建库，文库产量显著优于进口品牌（图2），map率（图3）及dup率（图4）与进口品牌相当。
图2. 不同投入量gdna建库产量
图3.不同投入量gdna map率
图4.不同投入量gdna dup率
02不同类型样本进行单链建库，文库产量更高对cfdna及ffpe dna样本进行亚硫酸盐转化，使用翌圣全套建库酶原料进行单链建库，结果显示使用翌圣酶原料进行单链建库，文库产量显著优于进口品牌（图5 a），map率（图5 b）及dup率（图5 c）与进口品牌相当。
图5. 不同样本单链建库产量、map率及dup率
单链建库解决方案
产品定位 产品名称 产品货号
亚硫酸氢盐转化 hieff® mag dna methylation bisulfite kit 12223es
3’端添加poly c terminal deoxynucleotidyl transferase末端转移酶 10302es
3’接头连接 e. coli dna ligase (60 u/μl) 14955es
taq dna ligase 11051es
dna二链合成 dna polymerase i 12903es
klenow fragment 14458es
klenow fragment (3'→5' exo-) 14460es
5’接头连接 hieff® quick t4 dna ligase 10301es
pcr文库扩增 hieff canace® uracil+ high-fidelity dna polymerase (1 u/μl) 10145es
完整甲基化建库试剂盒 hieff ngs® methyl-seq dna library prep kit for illumina® v2 12221es
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3’接头连接：tdt末端转移酶催化单链dna的3’羟基端加上同聚物尾巴（poly c），e.coli dna ligase 连接3’接头；
二链合成：dna ploymerase i或klenow fragment进行单链dna互补链合成；
5’接头连接：t4 dna ligase 连接5’接头；
文库扩增：耐u高保真dna聚合酶扩增，获取含有完整接头序列的上机文库。
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图2. 不同投入量gdna建库产量
图3.不同投入量gdna map率
图4.不同投入量gdna dup率
02不同类型样本进行单链建库，文库产量更高对cfdna及ffpe dna样本进行亚硫酸盐转化，使用翌圣全套建库酶原料进行单链建库，结果显示使用翌圣酶原料进行单链建库，文库产量显著优于进口品牌（图5 a），map率（图5 b）及dup率（图5 c）与进口品牌相当。
图5. 不同样本单链建库产量、map率及dup率
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亚硫酸氢盐转化 hieff® mag dna methylation bisulfite kit 12223es
3’端添加poly c terminal deoxynucleotidyl transferase末端转移酶 10302es
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dna二链合成 dna polymerase i 12903es
klenow fragment 14458es
klenow fragment (3'→5' exo-) 14460es
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