观赏植物种子无菌萌发与试管开花技术
一、实验目的
掌握利用种子作为外植体进行快速繁殖的方法；掌握试管花卉的培养技术；了解植物开花的影响因素。
二、实验原理
试管开花是指用组织培养的方法，使植物开花的过程在培养容器中完成。一般情况下，植物必须达到某种成熟阶段时才能开花。自1946年罗士韦在对菟丝子茎尖培养时发现了花器官的形成后，植物组织培养技术已用于植物离体开花的研究。影响试管开花的因素主要有外植体，外源植物激素，营养水平和环境因素等4个方面。通过改变培养基中外源植物激素、营养水平和培养环境条件，可以诱导培养物在试管内开花。
试管花卉作为高新技术与工艺生产相结合的新生物, 不仅在理论研究上有重要作用, 而且可以利用成花决定因素的研究来培养能迅速进入生殖阶段的试管苗或有观赏价值的试管花卉, 并将这一技术直接应用于花卉生产。试管花卉有较大市场前景,
目前可以做成试管花卉的植物有石斛兰、龙角、波露、短叶芦荟、美丽十二卷、鸡冠花、玫瑰、红莲、凤梨、大花蕙兰、狼牙掌、燕尾芦荟、非洲紫罗兰、下城芦荟、金线莲、迎春、六月雪、红叶李、无刺火棘、紫薇、情人草、康乃馨、幸运草、草莓、非洲菊、文心兰等。
三、实验器具与药品
①器材：电子天平、托盘天平、烧杯(50ml, 100ml, 500ml, 1000ml)、量筒(1000ml,100ml, 25ml)、容量瓶(1000ml,500ml,100ml)、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱、人工气候箱、移液枪、ph计、高压灭菌锅、超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培养皿。
②试剂：ms培养基各种母液、pp333、kt、6-ba、naa、iaa、蔗糖、琼脂、酒精、hgcl2。
③以矮生鸡冠花品系的种子为试材。
四、实验内容与操作步骤
1、培养基的配制
①种子萌发培养基：ms基本培养基
②增殖培养基：ms+naa 0.1mg·l-1+6-ba 1.0mg·l-1+ 蔗糖20 g·l-1+ 琼脂10 g·l-1
③试管开花诱导培养基：ms+ pp333 0.5mg·l-1+naa 0.01mg·l-1+ 蔗糖20 g·l-1+ 琼脂10g·l-1
2、种子灭菌
先用洗洁精洗净种子， 用自来水流水沖洗干净；再用0.1% hgcl2浸泡10 min，后用无菌水反复冲洗5 遍。在超净工作台上将灭菌后的种子接种到ms 培养基上，每三角瓶接种5-10个外植体。人工气候箱条件为：光照12h·d-1、光照强度1500lx、温度25～26℃。14d 后统计种子发芽率和污染率。
3、增殖培养
当无菌苗长到约2cm 时，取其中约1cm 芽段， 接种到②增殖培养基上，培养26 d 后统计其增殖倍数。
4、开花诱导
将高约2～3cm的试管苗，转到③试管开花诱导培养基中，人工气候箱条件：日温(25±2)℃，夜温(20±2)℃，光照强度1500～3000lx，光照时间12h/d，接种30d后观察统计试管内开花情况。
五、实验结果
观察试验结果，报告种子发芽率和污染率、增殖倍数和试管开花情况。
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掌握利用种子作为外植体进行快速繁殖的方法；掌握试管花卉的培养技术；了解植物开花的影响因素。
二、实验原理
试管开花是指用组织培养的方法，使植物开花的过程在培养容器中完成。一般情况下，植物必须达到某种成熟阶段时才能开花。自1946年罗士韦在对菟丝子茎尖培养时发现了花器官的形成后，植物组织培养技术已用于植物离体开花的研究。影响试管开花的因素主要有外植体，外源植物激素，营养水平和环境因素等4个方面。通过改变培养基中外源植物激素、营养水平和培养环境条件，可以诱导培养物在试管内开花。
试管花卉作为高新技术与工艺生产相结合的新生物, 不仅在理论研究上有重要作用, 而且可以利用成花决定因素的研究来培养能迅速进入生殖阶段的试管苗或有观赏价值的试管花卉, 并将这一技术直接应用于花卉生产。试管花卉有较大市场前景,
目前可以做成试管花卉的植物有石斛兰、龙角、波露、短叶芦荟、美丽十二卷、鸡冠花、玫瑰、红莲、凤梨、大花蕙兰、狼牙掌、燕尾芦荟、非洲紫罗兰、下城芦荟、金线莲、迎春、六月雪、红叶李、无刺火棘、紫薇、情人草、康乃馨、幸运草、草莓、非洲菊、文心兰等。
三、实验器具与药品
①器材：电子天平、托盘天平、烧杯(50ml, 100ml, 500ml, 1000ml)、量筒(1000ml,100ml, 25ml)、容量瓶(1000ml,500ml,100ml)、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱、人工气候箱、移液枪、ph计、高压灭菌锅、超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培养皿。
②试剂：ms培养基各种母液、pp333、kt、6-ba、naa、iaa、蔗糖、琼脂、酒精、hgcl2。
③以矮生鸡冠花品系的种子为试材。
四、实验内容与操作步骤
1、培养基的配制
①种子萌发培养基：ms基本培养基
②增殖培养基：ms+naa 0.1mg·l-1+6-ba 1.0mg·l-1+ 蔗糖20 g·l-1+ 琼脂10 g·l-1
③试管开花诱导培养基：ms+ pp333 0.5mg·l-1+naa 0.01mg·l-1+ 蔗糖20 g·l-1+ 琼脂10g·l-1
2、种子灭菌
先用洗洁精洗净种子， 用自来水流水沖洗干净；再用0.1% hgcl2浸泡10 min，后用无菌水反复冲洗5 遍。在超净工作台上将灭菌后的种子接种到ms 培养基上，每三角瓶接种5-10个外植体。人工气候箱条件为：光照12h·d-1、光照强度1500lx、温度25～26℃。14d 后统计种子发芽率和污染率。
3、增殖培养
当无菌苗长到约2cm 时，取其中约1cm 芽段， 接种到②增殖培养基上，培养26 d 后统计其增殖倍数。
4、开花诱导
将高约2～3cm的试管苗，转到③试管开花诱导培养基中，人工气候箱条件：日温(25±2)℃，夜温(20±2)℃，光照强度1500～3000lx，光照时间12h/d，接种30d后观察统计试管内开花情况。
五、实验结果
观察试验结果，报告种子发芽率和污染率、增殖倍数和试管开花情况。
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