质粒基因组提取实验步骤
dna提取是生物学实验中常见的实验步骤，用于分离和纯化dna以进行后续实验分析。本文将介绍使用天根质粒dna提取试剂盒进行质粒基因提取的实验步骤。该试剂盒使用碱裂解法提取质粒dna，具有简便快速、高效纯化的特点。
实验步骤如下：
一、培养细菌并制备含有质粒的细胞悬液：
1.从平板上挑取单克隆细菌，转入含有3ml lb+amp100培养基的试管中。使用含有抗生素氨苄青霉素的lb培养基可以选择性地培养含有质粒的细菌群体。
2.在37℃的恒温摇床上振荡培养过夜，以促进细菌生长并扩增质粒。
二、收集和裂解细胞，分离并纯化质粒dna：
3.将培养液倒入1.5 ml微量离心管中，以4000 r/min离心2 min，使细菌沉淀。
4.倒出培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
5.加入100μl溶液ⅰ（50 mmol/l葡萄糖，25mmol/ltris (ph 8.0)，10 mmol/l edta（ph 8.0）），充分振荡混匀，室温放置5 min。
6.加入200μl溶液ⅱ（0.2 mol/l naoh，1% sds），盖紧管口，颠倒混匀内容物，将离心管放置冰上5 min。
7.加入150μl溶液ⅲ（5 mol/l乙酸钾），盖紧管口，颠倒数次使混匀。冰上放置5 min。
8.以12000 r/min离心15 min，将上清转至另一离心管中。
9.可选择性地加入等体积氯仿/异戊醇（24:1）进行去蛋白处理，使dna与蛋白质分离。反复混匀后，以10000 r/min离心10 min，将上清转移到另一离心管中。该步骤可以根据实验需求选择性地进行。
10.向上清中加入2倍体积的乙醇（约700μl），混匀后，室温放置15-30min。以10000 r/min离心10 min。倒去上清液，将离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
11.用500μl 70%乙醇轻轻洗涤质粒dna沉淀，以10000 r/min离心5min，弃去上清液，并使沉淀干燥。
12.加入适量（20-50μl）的无菌水，室温使dna全溶解，然后将溶解的dna在-20℃保存。
实验中，天根质粒dna提取试剂盒提供了各种试剂和缓冲液，方便实验操作和质粒dna的提取。这些试剂的配方经过优化和验证，确保提取的质粒dna质量好、纯度高。
注意事项：
1.溶液ⅱ需要新鲜配制，以确保高效的细胞裂解和dna解链。
2.加入溶液ⅱ后不要剧烈震荡，以免影响dna质量。
3.沉淀dna通常使用冰冷的乙醇，加入后放置时间稍长可使dna沉淀全，并可用异丙醇代替乙醇，但需注意异丙醇会将盐沉淀下来。
4.在dna溶解过程中，温度要严格控制，避免过高的温度导致dna降解。
天根质粒dna提取试剂盒提供了方便、快速、高纯度的质粒dna提取方法。根据实验步骤操作，可以有效提取并纯化质粒dna。该方法适用于大量转化子中制备少量部分纯化的质粒dna，满足后续实验的需求。
苏州阿尔法生物提供的实验试剂主要有：
1.细胞类产品：
各种的肿瘤细胞、基因编辑细胞：比如常见的hek293细胞、cho细胞、骨髓干细胞、胚胎2.天根试剂盒产品：天根系列试剂盒主要有质粒大提、质粒小提等各种质粒抽提试剂盒、血液dna提取试剂盒、细菌dna提取试剂盒、病毒rna提取试剂盒、天根质粒dna提取试剂盒、植物组织dna提取试剂盒等各种基因组提取试剂盒。还有dh5&/top--10感受态等。
3.其他试剂类：细胞培养试剂、分子生物学试剂、缓冲液、培养基、抗体、碧云天试剂等。
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2.在37℃的恒温摇床上振荡培养过夜，以促进细菌生长并扩增质粒。
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3.将培养液倒入1.5 ml微量离心管中，以4000 r/min离心2 min，使细菌沉淀。
4.倒出培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
5.加入100μl溶液ⅰ（50 mmol/l葡萄糖，25mmol/ltris (ph 8.0)，10 mmol/l edta（ph 8.0）），充分振荡混匀，室温放置5 min。
6.加入200μl溶液ⅱ（0.2 mol/l naoh，1% sds），盖紧管口，颠倒混匀内容物，将离心管放置冰上5 min。
7.加入150μl溶液ⅲ（5 mol/l乙酸钾），盖紧管口，颠倒数次使混匀。冰上放置5 min。
8.以12000 r/min离心15 min，将上清转至另一离心管中。
9.可选择性地加入等体积氯仿/异戊醇（24:1）进行去蛋白处理，使dna与蛋白质分离。反复混匀后，以10000 r/min离心10 min，将上清转移到另一离心管中。该步骤可以根据实验需求选择性地进行。
10.向上清中加入2倍体积的乙醇（约700μl），混匀后，室温放置15-30min。以10000 r/min离心10 min。倒去上清液，将离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
11.用500μl 70%乙醇轻轻洗涤质粒dna沉淀，以10000 r/min离心5min，弃去上清液，并使沉淀干燥。
12.加入适量（20-50μl）的无菌水，室温使dna全溶解，然后将溶解的dna在-20℃保存。
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注意事项：
1.溶液ⅱ需要新鲜配制，以确保高效的细胞裂解和dna解链。
2.加入溶液ⅱ后不要剧烈震荡，以免影响dna质量。
3.沉淀dna通常使用冰冷的乙醇，加入后放置时间稍长可使dna沉淀全，并可用异丙醇代替乙醇，但需注意异丙醇会将盐沉淀下来。
4.在dna溶解过程中，温度要严格控制，避免过高的温度导致dna降解。
天根质粒dna提取试剂盒提供了方便、快速、高纯度的质粒dna提取方法。根据实验步骤操作，可以有效提取并纯化质粒dna。该方法适用于大量转化子中制备少量部分纯化的质粒dna，满足后续实验的需求。
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3.其他试剂类：细胞培养试剂、分子生物学试剂、缓冲液、培养基、抗体、碧云天试剂等。
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