细胞冻存有何注意事项?

细胞低温冻存是培养室常用技术。原理是将细胞放在-196℃液氮中,可以使细胞暂时脱离生长状态,减少细胞代谢,理论上储存时间几乎是无限的。那么细胞冻存有何注意事项呢?让我们一起来看看吧!
一、dms0稀释时会释放大量热量,不能直接加到细胞液中,须事先配制,且dmso必须是细胞培养级别的;
二、缓慢冷冻,细胞逐步脱水,不会因产生大的冰晶而受到损害;
三、选择细胞生长良好、密度约为80-90%、活力达90%以上的细胞冻存;
四、冻存时细胞密度少于5x105个活细胞/ml时,很难成功复苏;
五、细胞不可长期保存在-80°c冰箱中。我们建议在-80°c冰箱中的保存时间不要超过48h,放入液氮中保存;
六、冻存细胞操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤;
七、冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成支原体污染;
八、定期检查液氮储备,保证细胞全部浸在液面下;
九、冻存细胞时在每支冻存管都标上细胞的名称,冻存时间,并记录在册,避免取错细胞,找不到冻存管等情况;
十、细胞在冷冻过程中在-20c冰箱内放置时间不可超过1小时,以防止冰晶过大而破坏细胞。
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