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在运用前,将一切试剂和样品室温。再次离心样品冻结后测定前。据建议,一切样品和规范来测定一式两份。
1。准备好一切试剂,作业规范和样品在前面的章节中。
2。请断定井数的运用,并把任何剩下的井和入袋干燥剂,密封保鲜袋,将未运用的井在4°c的含量布局表
3。每孔参加100μl的规范和样品。封面用胶粘带供给。孵育2小时,在37℃下一盘布局记载规范和样品检测。
4。向每孔中参加100μl的hrp-抗*蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一个新的粘接剂条。温育1小时,在37℃下
5。重复的希望/洗刷过程中,在进程6的5倍。
6。将90μltmb底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟,在37℃下避光
7。一站式解决方案,每孔参加底物,悄悄晃动酶标板,以保证充沛混合。
8。每孔中取出的液体,不洗。
9。向每孔中参加100μl*抗体(1倍)。盖上一个新的胶粘带。为1小时孵育在37℃下(*抗体(1x)可能会呈现混浊。预热至室温,悄悄混匀,直到呈现均匀解决方案。)
10。吸液的各孔和洗刷,共洗刷三次重复该进程两次。洗净,每孔填充洗刷缓冲液(200μl)运用喷瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,静置2分钟,*铲除液体的每一步是*的杰出的功能。zui后一次洗刷后,铲除任何剩下洗刷缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂改对洁净的纸巾。
11。在5分钟内,设置至450nm,运用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校对,设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校对板的光学缺点。在450nm处未经批改读数直接,可能会比较高,不太。
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