稳定细胞有哪些?
属于稳定细胞的是肾小管上皮细胞及肝细胞。神经细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞属于永jiu性细胞。男性及女性生殖管道被覆上皮细胞、淋巴造血细胞、表皮细胞都是不稳定细胞。
稳定细胞(stable cells)又称静止细胞(quiescent cell)。在生理情况下,这类细胞增殖细胞不明显,在细胞增殖周期中处于静止(g0),但受到组织损伤的刺激时,则进入dna合成前期(g1),表现出较强的再生能力。这类细胞包括各种腺体或腺样器官的实质细胞,如胰、涎腺、内分泌腺、汗腺、皮脂腺和肾小管的上皮细胞等,由其构成的组织处于分裂期的细胞低于1.5%。此类组织中的内分泌腺和上皮无干细胞存在。
稳转细胞株的构建有哪些原理及方法?
稳转株即稳定表达的细胞株,指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。
稳转株的优势:
①通过建立稳转细胞系,可以降低频繁转染或者病毒包装的成本,方便在目的细胞中研究基因功能实验研究;
②区别于瞬时转染只能干扰表达,无法去除已表达的目的蛋白,构建稳转细胞系可以实现更好的基因干扰效果;
③瞬转会引入拷贝数的表达,导致因人为因素造成实验结果的不精确,建立稳转细胞系可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究;
④需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的。
稳转株构建原理:
通过将外源dna/shrna克隆到带有某种抗性基因的载体上,重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中,并能随细胞分裂稳定传递下去,再用载体中所含抗性基因进行筛选。
稳转株的构建方法:
目前常用到的方法有脂质体转染和病毒转染,病毒有慢病毒(lentivirus),腺病毒(adenovirus),逆转录病毒(retrovirus)。
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