凝胶色谱凝胶的处理与装填

凝胶是凝胶色谱分析的关键,是分离通过色谱柱溶剂中的分子的主要部件。凝胶的处理与选择决定了凝胶色谱的分离效果,对分析结果有很大的影响。因此操作人员需要正确装填凝胶,保证仪器的性能。
凝胶介质的预处理
在使用前凝胶应用水充分溶胀(胶:水=1:10),自然溶胀的耗时较长,可采用加热的方法使溶胀加速,即在沸水浴中将凝胶升温至沸,1~2h 即可达到溶胀。在烧杯中将干燥凝胶加水或缓冲液,搅拌,静置,倾去上层混悬液, 除去上清液中的凝胶碎块,重复数次,直到上清澄清为止。
选择色谱柱
色谱柱的体积和高径比与色谱分离效果密切相关,凝胶柱床的体积、柱长和柱的直径以及柱比的选择必须根据样品的数量,性质和分离目的进行确定。
凝胶柱的填装
凝胶色谱柱与其它色谱方法不同,溶质分子与固定相之间没有力的作用,样品组分的分离*依赖于他们各自的流速差异。填装时关住柱子下口,在柱内加入约 1/3 柱床体积的水或缓冲液,然后沿着柱子一侧将缓冲液中的凝胶搅 拌均匀,缓慢并连续的一次性注入柱内。待凝胶沉积约 5 厘米左右时,打开柱子下口,控制流速在 1ml/min。

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