百萤 Annexin V,TRITC标记------研究细胞凋亡的工具
1.百萤 annexin v,tritc标记参数
e x (nm) 544
e m (nm) 570
分 子 量 ~36000
溶 剂 water
存储条件 在零下15度以下保存，避光防潮
规 格 100次分析
有效成分 98%
类 型 蛋白质
2.百萤 annexin v,tritc标记概述
annexin v, tritc标记是美国aat bioquest生产的膜联蛋白，膜联蛋白是在钙存在下与磷脂膜结合的蛋白质家族。膜联蛋白v是研究细胞凋亡的有价值的工具。它用作检测在细胞表面表达磷脂酰*氨酸的细胞的探针，这是细胞凋亡以及其他形式的细胞死亡中发现的特征。有多种参数可用于监测细胞活力。annexin v-dye共轭物被广泛用于通过测量磷脂酰*氨酸（ps）的转运来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，ps转移到质膜的外部小叶。磷脂酰*氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察形态变化之前进行检测。这种荧光tritc-annexin v偶联物广泛用于通过流式细胞仪或荧光显微镜监测细胞凋亡。对于基于膜联蛋白v的细胞凋亡检测的微孔板检测，我们建议您使用cell meter™试剂盒。百萤生物是aat bioquest的中国代理商，为您提供优质的annexin v, tritc标记探针。
3.实验操作步骤
(1)用膜联蛋白v缀合物制备和孵育细胞：
(1.1)制备膜联蛋白v缀合测定缓冲液：10mm hepes，140mm nacl和2.5mm cacl2，ph 7.4。
(1.2)用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。
(1.3)离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。
(1.4)将细胞重悬于200μlannexin v结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。
(1.5)在细胞中加入2μl膜联蛋白v结合物。
可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。
(1.6)余ncubate在室温下进行30至60分钟，避光。
(1.7)在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μlannexin v结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。
(1.8)使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。
(2)使用流式细胞仪分析：
通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白v缀合物。
注意：粘附细胞上的膜联蛋白v结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，casiola-rosen等人先前报道了利用膜联蛋白v对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。和van engelend等人（见参考文献1和2）。
(3)使用荧光显微镜分析：
(3.1)移液器从步骤(1.6)，将细胞悬浮液冲洗1-2次用甲nnexin v-结合测定缓冲液（来自步骤1.1），然后与a重悬细胞nnexin v-结合测定缓冲液（来自步骤1.1）。将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。
注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白v缀合物（步骤1.6）孵育后，用nnexin v结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将annexin v结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。在与膜联蛋白v缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。
(3.2)在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白v缀合物的凋亡细胞。
关键词：流式细胞仪 荧光显微镜 显微镜 移液器
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2.百萤 annexin v,tritc标记概述
annexin v, tritc标记是美国aat bioquest生产的膜联蛋白，膜联蛋白是在钙存在下与磷脂膜结合的蛋白质家族。膜联蛋白v是研究细胞凋亡的有价值的工具。它用作检测在细胞表面表达磷脂酰*氨酸的细胞的探针，这是细胞凋亡以及其他形式的细胞死亡中发现的特征。有多种参数可用于监测细胞活力。annexin v-dye共轭物被广泛用于通过测量磷脂酰*氨酸（ps）的转运来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，ps转移到质膜的外部小叶。磷脂酰*氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察形态变化之前进行检测。这种荧光tritc-annexin v偶联物广泛用于通过流式细胞仪或荧光显微镜监测细胞凋亡。对于基于膜联蛋白v的细胞凋亡检测的微孔板检测，我们建议您使用cell meter™试剂盒。百萤生物是aat bioquest的中国代理商，为您提供优质的annexin v, tritc标记探针。
3.实验操作步骤
(1)用膜联蛋白v缀合物制备和孵育细胞：
(1.1)制备膜联蛋白v缀合测定缓冲液：10mm hepes，140mm nacl和2.5mm cacl2，ph 7.4。
(1.2)用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。
(1.3)离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。
(1.4)将细胞重悬于200μlannexin v结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。
(1.5)在细胞中加入2μl膜联蛋白v结合物。
可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。
(1.6)余ncubate在室温下进行30至60分钟，避光。
(1.7)在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μlannexin v结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。
(1.8)使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。
(2)使用流式细胞仪分析：
通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白v缀合物。
注意：粘附细胞上的膜联蛋白v结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，casiola-rosen等人先前报道了利用膜联蛋白v对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。和van engelend等人（见参考文献1和2）。
(3)使用荧光显微镜分析：
(3.1)移液器从步骤(1.6)，将细胞悬浮液冲洗1-2次用甲nnexin v-结合测定缓冲液（来自步骤1.1），然后与a重悬细胞nnexin v-结合测定缓冲液（来自步骤1.1）。将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。
注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白v缀合物（步骤1.6）孵育后，用nnexin v结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将annexin v结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。在与膜联蛋白v缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。
(3.2)在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白v缀合物的凋亡细胞。
关键词：流式细胞仪 荧光显微镜 显微镜 移液器
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