百萤-iFluor 488小麦胚芽凝集素（WGA）实验方案
小麦胚凝集素（wga）是一种与n-乙酰-d-葡萄糖胺和唾液酸结合的凝集素。它是目前研究多、应用广泛的一类凝集素。wga与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。百萤生物是aat bioquest的中国代理商，为您提供优质的ifluor 488小麦胚芽凝集素（wga）。
实验方案
样品分析方案
溶液配制
储备溶液配制
ifluor 488 小麦胚芽凝集素 (wga) 缀合物储备液 (200x)
将 500 µl ddh2o 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/ml 的储备溶液。 注意：重新配制的缀合物溶液可在 2-8 °c 下短期储存，或在 -20 °c 下长期储存。
工作溶液配制
ifluor 488-小麦胚芽凝集素 (wga) 缀合物工作溶液 (1x)
将 5 μl 200x wga 储备溶液添加到 1 ml hhbs 缓冲液中。
注意：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。 活细胞的推荐起始浓度为 5-10 µg/ml。
操作步骤
1.活细胞染色
1.1 用 hhbs 缓冲液清洗细胞两次。
1.2 添加 100 µl ifluor 488-wga 工作溶液。
1.3 将细胞与 wga 工作溶液在 37°c 下孵育 10-30 分钟。
1.4 用 hhbs 缓冲液清洗细胞两次。
1.5 使用 fitc 滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。
2.固定细胞染色
2.1 在pbs中使用4％的甲醛固定细胞。
注意：对于固定细胞膜染色，建议在没有透化步骤的情况下进行染色。固定后透化步骤会导致细胞内区室染色，如高尔基体和内质网 (er) 结构染色。
2.2 添加 100 µl ifluor 488-wga 工作溶液。
2.3 在室温下用 wga 工作溶液孵育细胞 10-30 分钟。
2.4 用 hhbs 缓冲液清洗细胞两次。
2.5 使用 fitc 滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。
实验图示
图 1. 使用 ifluor 488-小麦胚芽凝集素 (wga) 缀合物以 5 µg/ml的浓度在活细胞（hela细胞） 染色 30 分钟，然后用 hoechst 33342（cat#17535）染色。后使用带fitc和dapi滤波片组的荧光显微镜成像。
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将 5 μl 200x wga 储备溶液添加到 1 ml hhbs 缓冲液中。
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1.2 添加 100 µl ifluor 488-wga 工作溶液。
1.3 将细胞与 wga 工作溶液在 37°c 下孵育 10-30 分钟。
1.4 用 hhbs 缓冲液清洗细胞两次。
1.5 使用 fitc 滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。
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注意：对于固定细胞膜染色，建议在没有透化步骤的情况下进行染色。固定后透化步骤会导致细胞内区室染色，如高尔基体和内质网 (er) 结构染色。
2.2 添加 100 µl ifluor 488-wga 工作溶液。
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2.4 用 hhbs 缓冲液清洗细胞两次。
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