内质网α-甘露糖苷酶1抗体抗体分子标记技术
内质网α-甘露糖苷酶1抗体抗体分子标记技术：
（一）原理
当应用化学氧化法时(nai)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为残基,残基也可能进行化。在应用胺t( chloramine t)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把na125i和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
（二）准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/l磷酸钠缓冲液,ph7.5；无载体的na125i3.7gbq/ml(100mci/ml)的naoh液；100g/l三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺t的0.5mol/l磷酸钠缓冲液(ph7.5）；胺t反应终止缓冲液；
（三）操作要点
1.用胺t法进行化,也可在大约ph7.0的缓冲液中进行；
2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫酸荧光素(fitc)偶联)胺t量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；
3. iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；
5.要注意保证所用的na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；
6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
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生物磁珠2：壳聚糖磁珠
生物磁珠2：巯基磁珠（停产）
生物磁珠2：醛基磁珠（停产）
生物磁珠2：无包被磁珠
生物磁珠：氨基磁珠
生物磁珠：硅基磁珠
生物磁珠：环氧基磁珠
生物磁珠：羧基磁珠
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1.用胺t法进行化,也可在大约ph7.0的缓冲液中进行；
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4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；
5.要注意保证所用的na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；
6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
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