人视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRB)免疫组化试剂盒实验步骤
人视网膜母细胞瘤抑制蛋白(prb)免疫组化试剂盒实验步骤：
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯ⅰ、ⅱ、ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddh2o 洗2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddh2o 洗2×2min，tbs 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂b，37℃湿盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用试剂c（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂b，37℃湿盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂d），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
12.加hrp-sa： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂e（1：50~200，终浓度5~20 nm），
37℃湿盒中孵育30 min；
13.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min），tbs 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用dab 溶液（试剂f）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
磷酸化有丝分裂激酶b/c抗体
磷酸化腺泡acinus蛋白抗体
磷酸化肾上腺素能受体β2抗体
aps抗体
激活素受体样激酶1抗体
激活素a受体1b抗体
磷酸化雄激素受体抗体
磷酸化a-raf抗体
酰基鞘氨醇脱酰酶2抗体
脂肪细胞特异性粘附分子抗体
腺相关病毒5抗体
腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗体
腺苷单磷酸活化蛋白激酶β2抗体
磷酸化细胞周期末期促进复合蛋白apc1抗体
细胞周期末期促进复合蛋白apc1抗体
磷酸化蛋白激酶b2抗体
磷酸化铁蛋白fe65抗体
磷酸化铁蛋白fe65抗体
磷酸化app淀粉样肽前体蛋白抗体
磷酸化app淀粉样肽前体蛋白抗体
磷酸化活化复制因子2抗体
磷酸化活化复制因子2抗体
磷酸化细胞周期末期促进复合蛋白apc1抗体
关键词：显微镜
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3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddh2o 洗2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddh2o 洗2×2min，tbs 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂b，37℃湿盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用试剂c（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂b，37℃湿盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂d），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
12.加hrp-sa： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂e（1：50~200，终浓度5~20 nm），
37℃湿盒中孵育30 min；
13.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min），tbs 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用dab 溶液（试剂f）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
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