小鼠角膜成纤维细胞操作说明
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小鼠角膜成纤维细胞*培养基的基本特性:
(1)原代细胞培养末期液氮冻存。
(2)每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。
(3)不含有hiv-1、 hbv、hcv、支原体、细菌、酵母和真菌。
(4)代数:2-4代。
(5)用途:只可用于科研
小鼠角膜成纤维细胞*培养基操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、pbs放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量pbs润洗细胞,加入适量*,使*的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去*,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止*作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
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