发酵培养基成分之无机盐及微量元素
微生物在生长繁殖和生产过程中,需要某些无机盐和微量元素。
无机盐和微量元素是指除碳、氮元素外其他各种重要元素及其供体。它们在机体中的生理功能主要是作为酶活性中心的组成部分,维持生物大分子和细胞结构的稳定性,调节并维持细胞的渗透压平衡,控制细胞的氧化还原电位和作为某些微生物生长的能源物质等。
无机盐和微量元素根据微生物对其需求量的大小不同,有大量元素和微量元素之分。般微生物对大量元素的需求浓度为10-4-10-3
mol-l-1,常以盐的形式加入,如磷酸盐、硫酸盐以及含有钠、钾、钙、镁、铁等金属元素的化合物。微生物的生长还需要某些微量元素,如钻、铜、硒、锰、锌等,这些元素的需要量其微小,通常在10-8-10-6mol-l-1(培养基中含量)。除了合成培养基外,般在天然培养基中不再另外单加入无机盐和微量元素。因为天然培养基中的许多动、植物原料(如花生饼粉、黄豆饼粉、蛋白胨等)都含有多种微量元素,但有些发酵工业中也有单加入微量元素的。例如生产12时,尽管采用天然复合材料做培养基,但因钻元素是12的组成成分,其需求量是随产物量的增加而增加,所以,在培养基中就需要加入氯化钻以补充钻元素的不足。
1.磷酸盐
磷是某些蛋白质和核酸的组成成分,也是二磷酸腺苷(adp)、三磷酸腺苷(atp)的组成成分,在代谢途径的调节方面起着很重要的作用。般培养基中磷元素充足能促进微生物的生长。如黑曲霉nrrl330菌种生产a时,若加入0.2%磷酸二氢钾,则活力可比低磷酸盐提高3倍。但磷元素过量时,有些次代谢途径也会受到抑制,次代谢产物的合成常受抑制。例如,在的合成中,磷浓度过高就会抑制6磷酸葡萄糖脱氢酶的活性,使菌体生长旺盛,而的产量却很低,代谢向方向转化。磷元素的主要供体-磷酸盐在培养基中还具有缓冲作用。
微生物对磷的需要量般为0.005~0.01mol-l-1。工业生产上常用k3po4-3h20、k3po4和na2hpo4-12h20、nah2po4-2h20等磷酸盐,也可用磷酸(h3po4)。k3po4-3h20含磷13.55%,当培养基中用量在1-1.5g-l-1时,磷浓度为0.0044-0.0066mol-l-1。na2hpo4-12h20含磷8.7%,当培养基中用量在1.7-2.0g·l-1时,磷浓度为0.0048~0.00565mol·l-1。磷酸含磷3.16%,当培养基中用量在0.5~3.7g-l-1时,磷浓度为0.005~0.007mol-l-1。如果使用磷酸,应先用naoh或koh中和后加入。另外,玉米浆、糖蜜、淀粉水解糖等原料中还有少量的磷。
2.
镁是某些细菌的叶绿素的组成成分,虽不参与任何细胞结构物质的组成,但它的离子状态是许多重要酶(如己糖磷酸化酶、异柠檬酸脱氢酶、羧化酶等)的激活剂。镁离子能提高些氨基糖苷类抗生素产生菌(如、、新生霉素等产生菌)对自身所产的抗生素的耐受能力。另外,如果镁离子含量太少,还会影响基质的氧化。
般革兰阳性菌对mg2+的低要求量是25mg-l-1;革兰阴性菌为4-5mg-l-1。mgso4-7h20中含mg2+9.87%,发酵培养基用量为
0.25~1g-l-1时,mg2+浓度25~90mg-l-1。
硫存在于细胞的蛋白质中,是含硫氨基酸的组成成分和某些辅酶的活性基团,如、硫锌酸和等。在某些产物(如、等分子)中均含硫,所以在这些产物的生产培养基中,需要加入等硫酸盐作为硫源。而如硫化氢、硫化亚铁等还原态的硫化物,对大多数发酵用微生物是有毒的,般不能作为硫源。
3.钾、钠、钙、铁盐
钾不参与细胞结构物质的组成,它与细胞渗透压和透性有关,是许多酶的激活剂。钾对发酵有影响;钾盐少,长菌体;钾盐足够,产。菌体生长需钾量约为0.1g·l-1(以k2so4计,下同),生成需钾量为0.2~1.0g-l-1。当培养基中使用1g·l-1
k3po4-3h20时,钾浓度约为0.38g-l-1。如果采用na2hpo4-12h20时,应配用0.3-0.6g-l-1kci,此时钾浓度为0.35~0.7g-l-1。
钠离子与维持细胞渗透压有关,故在培养基中常加入少量钠盐,但用量不能过高,否则会影响微生物生长。
钙离子主要控制细胞透性。常用的碳酸钙本身不溶于水,几乎是中性的,但它能与代谢过程中产生的酸起反应,形成中性化合物和二氧化碳,后者从培养基中逸出,因此碳酸钙对培养液的ph有定的调节作用。在配制培养基时要注意两点:是培养基中钙盐过多时,会形成磷酸钙沉淀,降低了培养基中可溶性磷的含量,因此,当培养基中磷和钙均要有较高浓度时,可将两者分别灭菌或逐步补加;二是先要将配好的培养基用碱调ph近中性,才能将caco3加入培养基中,这样可防止caco3在酸性培养基中被分解,而失去其在发酵过程中的缓冲能力,同时所采用的caco3要对其中ca0等杂质含量做严格控制。
铁是细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的成分,因此铁是菌体有氧氧化的元素。工业生产上般用铁制发酵罐,在般发酵培养基中不再加入含铁化合物。
4.氯离子
氯离子在般微生物中不具有营养作用,但对些嗜盐菌来讲是必需的。此外,在些产生含氯代谢物(如和等)的发酵中,除了从其他天然原料和水中带入的氯离子外,还需加入约0.1%以补充氯离子。啤酒在糖化时,氯离子含量在20-60mg l-1范围内能赋予啤酒柔和的口味,并对酶和酵母的活性有定的促进作用,但氯离子含量过高会引起酵母早衰,使啤酒带有咸味。
5.微量元素
微量元素大部分作为酶的辅基和激活剂。例如,锰是某些酶的激活剂,羧化反应必须有锰参与;在生物合成途径中,草酰琥珀脱羧生成a酮戊二醛是在mn2+存在下完成的。般培养基配用2mg l-1mnso4-4h20。
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