细胞学堂 | 实验室细胞计数指南
细胞计数是实验室中常见的一项操作，用于确定样品中细胞的数量，判断细胞数量是否满足实验需求。本期细胞学堂为大家整理了几种常见的计数方法：人工手动计数法、自动细胞计数仪法，以及悬浮细胞和贴壁细胞在不同密度下的镜下视野的参考范围，帮助您快速上手开展实验。
1
人工手动计数法
即通过肉眼观察显微镜视野中的细胞数量，从而进行统计。
操作步骤
1
将计数板及盖玻片擦拭干净，并将盖玻片盖在计数板上；
2
轻轻吹打细胞悬液，使细胞均匀分布；吸出10μl-20μl左右的细胞悬液滴在盖片边缘，使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间；
3
静置1min-2min，使细胞沉降；注意盖玻片下不要有气泡，也避免细胞悬液进入旁边的槽中；
4
在显微镜下对a/b/c/d四个大格内的细胞进行计数，压在大格四周边线上的细胞只计数压在2条边线上的细胞（如左侧和上方）；若镜下有2个细胞组成的细胞团，则应按单个细胞计算；若细胞团数量较多，占细胞总量的10%左右，则说明细胞分散不好会导致计算不准确，需要重新制备细胞悬液，细胞量较多的时候，需要借助计数器；
5
按公式计数细胞数量：细胞数/ml=四个大格内细胞总数（每个大格共计16个小格）×104/4。
2
自动细胞计数仪法
即通过仪器进行计数，例如血细胞计数仪或显微镜配备的图像分析系统。这些设备能够自动识别和计数细胞，提高计数的准确性和效率。
操作步骤
1
将计数板及盖玻片擦拭干净，并将盖玻片盖在计数板上；
2
轻轻吹打细胞悬液，使细胞均匀分布；吸出少许细胞悬液滴在盖片边缘，使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间；
3
静置1min-2min，使细胞沉降；注意盖玻片下不要有气泡，也避免细胞悬液进入旁边的槽中；
4
将计数板放置在仪器中，按要求设置参数，仪器自动计数；
3
基于镜下密度估计细胞密度
在实际细胞培养过程中，若没有计数条件或者对于细胞数量不要求定量，也可基于肉眼去观察镜下的细胞密度去估计细胞是否可以传代。以下是悬浮细胞和贴壁细胞不同密度下的镜下视野可以给大家作为参考。（需要注意的是，不同大小的细胞，密度值是有差异的，这里列举的是较常见的例子）
01贴壁细胞的密度参考
显微镜下不同密度的贴壁细胞
02 悬浮细胞的密度参考
悬浮细胞接种到t25的瓶子里混匀后，在显微镜下静置3min-5min后，拍照得到：（悬浮细胞在移动的时候，细胞会像向中间移动，导致密度不均）
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人工手动计数法
即通过肉眼观察显微镜视野中的细胞数量，从而进行统计。
操作步骤
1
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静置1min-2min，使细胞沉降；注意盖玻片下不要有气泡，也避免细胞悬液进入旁边的槽中；
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在显微镜下对a/b/c/d四个大格内的细胞进行计数，压在大格四周边线上的细胞只计数压在2条边线上的细胞（如左侧和上方）；若镜下有2个细胞组成的细胞团，则应按单个细胞计算；若细胞团数量较多，占细胞总量的10%左右，则说明细胞分散不好会导致计算不准确，需要重新制备细胞悬液，细胞量较多的时候，需要借助计数器；
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按公式计数细胞数量：细胞数/ml=四个大格内细胞总数（每个大格共计16个小格）×104/4。
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自动细胞计数仪法
即通过仪器进行计数，例如血细胞计数仪或显微镜配备的图像分析系统。这些设备能够自动识别和计数细胞，提高计数的准确性和效率。
操作步骤
1
将计数板及盖玻片擦拭干净，并将盖玻片盖在计数板上；
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轻轻吹打细胞悬液，使细胞均匀分布；吸出少许细胞悬液滴在盖片边缘，使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间；
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静置1min-2min，使细胞沉降；注意盖玻片下不要有气泡，也避免细胞悬液进入旁边的槽中；
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将计数板放置在仪器中，按要求设置参数，仪器自动计数；
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基于镜下密度估计细胞密度
在实际细胞培养过程中，若没有计数条件或者对于细胞数量不要求定量，也可基于肉眼去观察镜下的细胞密度去估计细胞是否可以传代。以下是悬浮细胞和贴壁细胞不同密度下的镜下视野可以给大家作为参考。（需要注意的是，不同大小的细胞，密度值是有差异的，这里列举的是较常见的例子）
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02 悬浮细胞的密度参考
悬浮细胞接种到t25的瓶子里混匀后，在显微镜下静置3min-5min后，拍照得到：（悬浮细胞在移动的时候，细胞会像向中间移动，导致密度不均）
k562细胞混匀静置3~5分钟后拍照（100x拍摄）
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