申克孢子细菌探针法荧光定量PCR试剂盒
申克孢子细菌探针法荧光定量pcr试剂盒产品及特点 ：
本产品是根据探针法qpcr原理开发检测申克孢子细菌的产品，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品dna模板。
2.根据申克孢子细菌设计引物和探针，能专一性地检测出申克孢子细菌，但不能检测其他非申克孢子细菌。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5.本产品只能用于科研。
6.本产品足够50次体系的荧光定量pcr。
运输及保存自备试剂使用方法低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。dna模板一、稀释标准曲线样品（以10e2-10e7拷贝/μl这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45μl荧光pcr专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5μl1×10e8拷贝/μl的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10e7拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5μl1×10e7拷贝/μl的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e6拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5μl1×10e6拷贝/μl的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e5拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
申克孢子细菌探针法荧光定量pcr试剂盒二、样品dna的制备
7.用自选方法纯化样品的dna，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有n个样品，则需要进行n+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。三、设置qpcr反应（20μl体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记n+9个pcr管，其中n+2个用于上步得到的n+2个样品，1个用于pcr阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记n+4个pcr管，其中n+2个用于上步得到的n+2个样品，1个用于pcr阴性对照（用水做模板），1个用于pcr阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：
四、qpcr反应参数
过程温度时间预变性95℃5minpcr反应（40个循环）95℃15sec60℃1min（采集fam通道的荧光信号）
五、数据处理11.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的ct值从标准曲线上推算出样品rna浓度的log值，再推算出其浓度。
12.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照ct必须大于或等于35。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其ct大于或等于35则为阴性，如果小于或等于30则为阳性。如果在30-35之间，则重复一次。重复实验的ct值如果大于或等于35则为阴性，如果小于35，则为阳性。
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1.即开即用，用户只需要提供样品dna模板。
2.根据申克孢子细菌设计引物和探针，能专一性地检测出申克孢子细菌，但不能检测其他非申克孢子细菌。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5.本产品只能用于科研。
6.本产品足够50次体系的荧光定量pcr。
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1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45μl荧光pcr专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5μl1×10e8拷贝/μl的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10e7拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5μl1×10e7拷贝/μl的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e6拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5μl1×10e6拷贝/μl的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e5拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
申克孢子细菌探针法荧光定量pcr试剂盒二、样品dna的制备
7.用自选方法纯化样品的dna，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有n个样品，则需要进行n+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。三、设置qpcr反应（20μl体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记n+9个pcr管，其中n+2个用于上步得到的n+2个样品，1个用于pcr阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记n+4个pcr管，其中n+2个用于上步得到的n+2个样品，1个用于pcr阴性对照（用水做模板），1个用于pcr阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：
四、qpcr反应参数
过程温度时间预变性95℃5minpcr反应（40个循环）95℃15sec60℃1min（采集fam通道的荧光信号）
五、数据处理11.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的ct值从标准曲线上推算出样品rna浓度的log值，再推算出其浓度。
12.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照ct必须大于或等于35。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其ct大于或等于35则为阴性，如果小于或等于30则为阳性。如果在30-35之间，则重复一次。重复实验的ct值如果大于或等于35则为阴性，如果小于35，则为阳性。
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