植物RNA提取试剂盒的操作步骤
植物rna提取试剂盒的操作步骤
背景
植物rna提取试剂盒用于从各种植物中提取纯化高品质总rna，也适用于真菌菌丝rna的提取。独-特的shredder分离柱，用于匀质化和过滤高粘度的植物或真菌裂解物，同时采用硅基质膜吸附rna进行纯化，使多聚糖等各种污染物通过洗涤被有效去除，经洗脱的rna可直接用于各种下游实验。由本试剂盒提取rna分子量大于200碱基，纯度高，几乎无dna残留。如果是对微量dna非常敏感的rna实验，残留的dna可利用无rnase的dnase在柱上进行消化去除。提取的rna可用于northern blot、dot blot、rt-pcr和体外翻译等实验。
植物rna提取试剂盒
操作步骤：
1、50-100 mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入600μl buffer rl(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)或buffer rlc。涡旋振荡使其充分裂解。
2、将步骤1所得全部液体转移至已装入收集管的过滤柱中，12000rpm(~～13400×g)离心2分钟，将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。
3、在步骤2所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇，迅速混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，但不影响后续试验。
4、将上步得到的溶液转移到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入;12000rpm离心15秒，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl buffer rw1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制dnase i混合液：取52μl rnase-free water，向其中加入8μl 10×reaction buffer和20μl dnase i(1 u/μl)，混匀，配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl dnase i混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl buffer rw1,12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl buffer rw2(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心15秒,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心1分钟，将吸附柱置于室温数分钟，以*晾干吸附柱中的无水乙醇。
12、将吸附柱装入新的离心管中，向吸附膜的中间加入30-50μl rnase-free water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，得到的rna溶液保存在-70℃，防止降解。
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植物rna提取试剂盒
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2、将步骤1所得全部液体转移至已装入收集管的过滤柱中，12000rpm(~～13400×g)离心2分钟，将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。
3、在步骤2所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇，迅速混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，但不影响后续试验。
4、将上步得到的溶液转移到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入;12000rpm离心15秒，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl buffer rw1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制dnase i混合液：取52μl rnase-free water，向其中加入8μl 10×reaction buffer和20μl dnase i(1 u/μl)，混匀，配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl dnase i混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl buffer rw1,12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl buffer rw2(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心15秒,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心1分钟，将吸附柱置于室温数分钟，以*晾干吸附柱中的无水乙醇。
12、将吸附柱装入新的离心管中，向吸附膜的中间加入30-50μl rnase-free water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，得到的rna溶液保存在-70℃，防止降解。
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