大肠杆菌计数标准解读ISO 16649-1：2018
大肠杆菌和粪大肠菌群的计数一致是一项食品卫生的常规检测。2018年，iso发布了新版iso 16649-1：2018，即“食品链的微生物学——β-葡萄糖醛酸酶阳性大肠杆菌计数的水平方法.第1部分 使用膜和5-溴-4-氯-3-吲哚β-d-葡萄糖醛酸酐在44℃的菌落计数技术”。
iso 16649-1:2018取代的是iso 16649-1:2001,在如下方面有修改：
1）环境和初级食品生产阶段的取样
2）对于tbx培养基（胰胨胆盐葡萄糖醛酸酐琼脂）孵育时间规定至少20h
3）添加了培养基和滤膜的性能试验
4）为了安全性，不再*dmso来溶解葡萄糖醛酸酶的显色底物bcig
5）无机盐改良*盐琼脂（mmga）的组成进行了调整
该标准适合食品、饲料、食品生产车间的环境样本等。
在流程上，可分为如下几步：
1）复苏。
用无菌镊子夹一张膜放到mmga培养基的干燥表面，避免膜下产生气泡。可用涂布棒把膜压平。用无菌移液器将1ml样本液加到膜*，使用涂布棒将接种液均匀分布到整个膜表面。将平板在室温静置15分钟，直到接种液浸透整个膜。再孵育4h±0.25h，37℃，膜/琼脂表面朝上。
2）分离。
使用无菌镊子将膜转移到tbx培养基上。在孵箱中44℃孵育20h~24h。有蓝色或蓝绿色菌落则为葡萄糖醛酸酶阳性的大肠杆菌。选择典型菌落数150的平皿进行计数。
3）结果计算和报告
世界微生物培养基生产商himedia公司提供有iso的培养基，如无机盐改良*盐琼脂（minervals-modified glutamate agar，mmga），货号为m643i，配方与iso 16649-1:2018的*一致，只有氯化铵需用户自己准备。对于tbx培养基，himedia公司提供有hicrome™ e. coli agar，货号m1295i，配方与iso 16649-1:2018的*一致。在该培养基中，大肠杆菌为蓝绿色菌落，沙门氏菌为无色菌落，葡萄球菌被抑制生长（见下图）。
himedia公司从1975年起即致力于微生物培养基和细胞培养基的生产和研发，具有who gmp认证、iso9001：2008，iso13485：2003认证，ce认证和fda注册登记，尤其通过ce的体外诊断注册。其产品行销140多个。
缔一生物作为himedia公司在中国的代理商，在微生物培养和检测领域，一如既往地为您带来的服务。
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2）分离。
使用无菌镊子将膜转移到tbx培养基上。在孵箱中44℃孵育20h~24h。有蓝色或蓝绿色菌落则为葡萄糖醛酸酶阳性的大肠杆菌。选择典型菌落数150的平皿进行计数。
3）结果计算和报告
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himedia公司从1975年起即致力于微生物培养基和细胞培养基的生产和研发，具有who gmp认证、iso9001：2008，iso13485：2003认证，ce认证和fda注册登记，尤其通过ce的体外诊断注册。其产品行销140多个。
缔一生物作为himedia公司在中国的代理商，在微生物培养和检测领域，一如既往地为您带来的服务。
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