细胞培养冻存时的注意事项

细胞培养冻存时的注意事项：1、在冷冻保存之前，应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高，冻存的细胞密度为80 – 90 ％2、冷冻前检测细胞是否保有其*性质，例如是否有杂细胞或者支原体等。3、 使用的dmso 应为试剂级等级，以5~10 ml 小体积分装，4 度避光保存，勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。4、冷冻保存的细胞浓度：4-1、正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml4-2、杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。4-3、贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6，依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度，而hela 只需1-3 x 10^6 cells/ml。4-4、 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。5、冷冻保护剂浓度为5 %或10 ％ dmso，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。

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