今年诺贝尔医学奖授予美国科学家卡塔林·卡里科(katalin karikó)和德鲁·魏斯曼(drew weissman),表彰他们在核苷碱基修饰方面的发现,从而开发出有效的mrna疫苗。mrna疫苗作为一种新型疫苗,不仅在新冠中有突出的贡献,同样有益于其他疾病,尤其是传染性疾病的预防上。小优整理了二位科学家在近年来mrna疫苗的开发中使用的关键试剂,让大家有更好的选择。
一、无内毒素质粒纯化试剂盒drew weissman在研究中一直选择来自qiagen的endofree plasmid kit,他关注于质粒的产品、纯度、内毒素以及超螺旋占比,对后续的ivt效率有较大的影响,多次发表在vaccine、nature、science advances等杂质中[1,2,3]。
二、病毒rna纯化试剂盒qiaamp viral rna mini kit为新冠研究中的明星试剂盒,被who和中国cdc推荐为病毒rna纯化的第一选择试剂,其du特的回收柱有高达90%的回收率,同样有96孔板高通量形式,适合多种的应用场景[3]。
三、mrna纯化/回收试剂盒作为mrna疫苗生产的关键步骤之一,mrna的加帽率较为重要,纯化效率是mrna疫苗中的关键一环,katalin karikó发表在pharmaceutics杂志上题为 “ribozyme assays to quantify the capping efficiency of in vitro-transcribed mrna” 的一篇文章中,设计了一种核酶介导的加帽效率测定方法,经过实验验证,其加帽效率测定方法优于传统方法。使用了qiagen基于硅胶模柱分级纯化方案,即qiagen rneasy mini kit。该试剂盒中的硅胶模纯化柱可以在不同的缓冲液条件下,结合不同长度的rna片段。最后,将硅胶柱纯化得到的短5'切割产物和核酶用21% page+8m尿素或者lc-ms进行定量分析和可视化,得出不同方法的结果比较。具体流程如下[4]。
四、蛋白纯化试剂qiagen的ni产品一直备受青睐,2022年诺贝尔化学奖得主carolyn r.bertozzi,morten meldal 和k.barry sharpless也多次使用ni-nta产品,其四价螯合比ni-ida 3价螯合获得的纯化更高,一次纯化即可得到95%纯化蛋白,结合量克搞到50mg蛋白/ml树脂。drew weissman同样使用qiagen的ni产品并发表在顶级杂质上[5,6,7,8,9]。
优宁维致力于提供mrna完整解决方案,包括但不限于mrna合成原材料、工具或定制mrna、mrna研究及qc的众多产品。
参考文献:#1:anti-pfgarp activates programmed cell death of parasites and reduces severe malaria#2:tick immunity using mrna, dna and protein-based salp14 delivery strategies#3:immunogenicity and protective efficacy of sars-cov-2 mrna vaccine encoding secreted non-stabilized spike in female mice#4:ribozyme assays to quantify the capping efficiency of in vitro-transcribed mrna#5:mrna-lnp expressing pfcsp and pfs25 vaccine candidates targeting infection and transmission of plasmodium falciparum#6:mrna vaccination induces tick resistance and prevents transmission of the lyme disease agent#7:in vivo adenine base editing of pcsk9 in macaques reduces ldl cholesterol levels#8:a multi-targeting, nucleoside-modified mrna influenza virus vaccine provides broad protection in mice#9:sars-cov-2 mrna vaccines foster potent antigen-specific germinal center responses associated with neutralizing antibody generation
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