大鼠elisa酶联免疫试剂盒比较常用检测方法

大鼠elisa酶联免疫试剂盒在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是elisa双抗体夹心法及elisa间接法。
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05m ph9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟5. 终止反应:于各反应孔中加入2m硫酸0.05ml。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
1. 用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。
2. 次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,后一遍用ddw(超纯水)洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
3. 大鼠elisa酶联免疫试剂盒加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。4. 终止反应:于各反应孔中加入2m硫酸0.05ml。
lcat 磷酸化膜相关蛋白*激酶lyn抗体
l-citrulline 磷酸化膜相关蛋白numb抗体
lck/p56-lck 磷酸化酶激酶γ2
ldh/ldha 磷酸化酶激酶γ1
ldha 磷酸化酶β抗体
ldhc/cancer,testis antigen 32 磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体
ldl 磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体
ldl receptor/ldl-r 磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体
lef-1 磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体
legumain 磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体
大鼠elisa酶联免疫试剂盒

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