树舌灵芝深层发酵培养基的优化研究
今天喆图小编就来说说树舌灵芝又称树舌扁灵芝，属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非菌褶目、灵芝菌科、灵芝属。树舌具有广泛的药理活性，民间用其治疗食道癌、肺结核，临床用于治疗腹水癌、神经系统疾病、肝炎、心脏病、糖尿病和糖尿病并发症，预防和治疗胃溃疡、急慢性胃炎、十二指肠溃疡、胃酸过多等胃病。另外研究表明，树舌三萜类物质具有血压双向调节、抗肿瘤、抗病毒等药理活性。目前国内对树舌灵芝的化学成分和药理学研究得比较多，但对树舌灵芝深层发酵方面的研究较少。深层发酵培养树舌菌丝体具有发酵周期短、工艺简单、易控制、适于工业化大生产等优点。本试验应用高氯酸——*显色法来测定树舌灵芝发酵菌丝总三萜类化合物含量，以总三萜产量为基准，筛选出树舌灵芝深层发酵的适培养基。
通过单因素试验，确定树舌灵芝的适宜氮源为豆饼粉，适宜碳源为米糠和蔗糖；在此基础上，以筛选的碳源、氮源和无机盐kh2po4和mgso4·7h2o为考察因素，以总三萜产量为主要指标利用正交试验优化培养基配方比例，确定树舌灵芝液体发酵培养基配方为：米糠4%、蔗糖1%、豆饼粉4%、kh2po40.2%、mgso4·7h2o0.05%。
一、（材料和仪器）
1、实验所需材料 硝酸铵、硫酸铵、氯化铵、硝酸钾、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、*、*、高氯酸、冰醋酸、*均为分析纯；*对照品，中国药品生物制品检定所；豆饼粉、玉米粉、麦芽粉、甘薯粉、米糠和麸皮均为提取液，煮沸0.5h后用纱布过滤制得。
2、实验用主要仪器设备
鼓风干燥箱，立式高压灭菌锅，电子天平，紫外分光光度计，恒温水浴锅，恒温摇床，恒温培养箱。
二、（实验方法 ：基本培养基）
1.1斜面培养基 pda培养基为土豆20%，葡萄糖2%，琼脂2%，ph自然。接一块绿豆粒菌块接种于pda培养基*放入恒温培养箱中25℃恒温培养7天。
1.2液体培养基 玉米粉1%，蔗糖2%，蛋白胨0.5%，kh2po40.1%，mgso4·7h2o0.05%，ph自然。
1.3氮源筛选培养基 葡萄糖2%，可溶性淀粉1%，kh2po40.1%，mgso4·7h2o0.05%，ph自然。分别以豆饼粉、麸皮、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、硝酸钾为氮源，添加量为2%。
1.4碳源筛选培养基 麸皮2%，kh2po40.1%，mgso4·7h2o0.05%，ph自然。分别以葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、玉米粉、麦芽粉、甘薯粉、米糠等为碳源，添加量为3%。
培养方法
2.1种子液制备 将斜面菌种分割成黄豆大小，接种到液体培养基中，250ml三角瓶装液量100ml，于恒温摇床中25℃，120r/min振荡培养10d得一级种。将已经培养好的一级种以体积分数10%接种到同样液体培养基中，500ml三角瓶装液量200ml，在与一级种同样条件下培养7d得种子液备用。
2.2培养基筛选 将制备好的种子液按体积分数10%接种量接种到不同的碳氮源培养基及正交试验筛选培养基中，250ml三角瓶装液量100ml，于恒温摇床中25℃，120r/min振荡培养7d后收集菌丝体。分析不同碳源、氮源对菌丝体生物量和三萜总量的影响。每次试验重复3次，结果取平均值。
2.3混合碳氮源培养基正交试验 根据单因素试验筛选结果，并考虑到低投入高产出的原则，选用米糠和蔗糖作为复合碳源，豆饼粉作为氮源，磷酸二氢钾和*作为无机盐，按l9（34）设计四因素三水平试验，9个组合，4次重复，优化培养基。
2.4发酵菌丝体生物量测定 采用细胞干重法，取100ml发酵液，用100目纱网过滤得菌丝体，并用蒸馏水反复冲洗，至滤出液澄清为止，收集菌丝体，于60℃鼓风干燥箱中烘干至恒重，称重。
三、（三萜含量测定）
3.1 标准溶液的制备（200μg/ml*）称取干燥至恒重的*20mg，置于100ml的容量瓶中加无水乙醇溶解，并定容至刻度，作为对照品溶液。
3.2样品溶液的制备 取样品0.5g（到万分之一），加入10ml无水乙醇，超声波提取30min后，摇匀，过滤，取滤液，定容至50ml，即得样品溶液。用分光光度法测定样品中灵芝三萜物质含量。
3.3 标准曲线的制作 精密吸取*标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml,于6只具塞磨口试管中。加5%*-冰醋酸液0.4ml，摇匀。再加入0.6ml高氯酸，置于60℃恒温水浴锅中20min，冰浴冷却后，加冰醋酸5.0ml，摇匀，置于室温15min后，按分光光度法（《中国药典》2005版 i部附录va），以试剂为空白，在545nm处比色测定吸光度值。以*浓度（g/ml） 为横坐标，吸光度a为纵坐标，作图得标准曲线。
3.4 样品的测定 吸取1ml样品溶液，按标准曲线方法测定吸光度。用标准曲线法计算样品中总三萜酸提取物质量。
以上内容仅供参考，如需了解详情请致电喆图！喆图人将真诚为您服务！
美国Ampco双螺杆泵--*代理--赫尔纳
IFM压缩空气流量计SD9500现货
一文了解螃蟹的选购技巧
造成矿井除尘设备布袋损坏的原因有哪些
旋转高压风机在各行业中的应用及优势说明
树舌灵芝深层发酵培养基的优化研究
兔白细胞介素17（IL-17）试剂盒（ELISA）
List-Magnetik磁场测量仪的功能性作用
风琴防护罩厂家告诉你风琴防护罩都有什么用途？
TB-1-B理疗型*仪台式技术参数
如何提高矿用电缆控制线芯的使用寿命
HZ-9211K台式气恒温振荡器有着广泛而重要的应用
BAUMER编码器GM400.A10A304性能
磁力泵在运转过程中需要注意的事项
小鼠5核苷酸酶elisa检测试剂盒样本处理及要求
英国Sheen光泽仪特点、参数
自动部份收集器的结构特点
马弗炉/灰化炉/实验室高温箱式炉 中西器材 型号:M366798
EN X5CrNiCuNb16-4上海隆继批发商
塑料拖链和钢制拖链的区别介绍
通过单因素试验，确定树舌灵芝的适宜氮源为豆饼粉，适宜碳源为米糠和蔗糖；在此基础上，以筛选的碳源、氮源和无机盐kh2po4和mgso4·7h2o为考察因素，以总三萜产量为主要指标利用正交试验优化培养基配方比例，确定树舌灵芝液体发酵培养基配方为：米糠4%、蔗糖1%、豆饼粉4%、kh2po40.2%、mgso4·7h2o0.05%。
一、（材料和仪器）
1、实验所需材料 硝酸铵、硫酸铵、氯化铵、硝酸钾、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、*、*、高氯酸、冰醋酸、*均为分析纯；*对照品，中国药品生物制品检定所；豆饼粉、玉米粉、麦芽粉、甘薯粉、米糠和麸皮均为提取液，煮沸0.5h后用纱布过滤制得。
2、实验用主要仪器设备
鼓风干燥箱，立式高压灭菌锅，电子天平，紫外分光光度计，恒温水浴锅，恒温摇床，恒温培养箱。
二、（实验方法 ：基本培养基）
1.1斜面培养基 pda培养基为土豆20%，葡萄糖2%，琼脂2%，ph自然。接一块绿豆粒菌块接种于pda培养基*放入恒温培养箱中25℃恒温培养7天。
1.2液体培养基 玉米粉1%，蔗糖2%，蛋白胨0.5%，kh2po40.1%，mgso4·7h2o0.05%，ph自然。
1.3氮源筛选培养基 葡萄糖2%，可溶性淀粉1%，kh2po40.1%，mgso4·7h2o0.05%，ph自然。分别以豆饼粉、麸皮、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、硝酸钾为氮源，添加量为2%。
1.4碳源筛选培养基 麸皮2%，kh2po40.1%，mgso4·7h2o0.05%，ph自然。分别以葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、玉米粉、麦芽粉、甘薯粉、米糠等为碳源，添加量为3%。
培养方法
2.1种子液制备 将斜面菌种分割成黄豆大小，接种到液体培养基中，250ml三角瓶装液量100ml，于恒温摇床中25℃，120r/min振荡培养10d得一级种。将已经培养好的一级种以体积分数10%接种到同样液体培养基中，500ml三角瓶装液量200ml，在与一级种同样条件下培养7d得种子液备用。
2.2培养基筛选 将制备好的种子液按体积分数10%接种量接种到不同的碳氮源培养基及正交试验筛选培养基中，250ml三角瓶装液量100ml，于恒温摇床中25℃，120r/min振荡培养7d后收集菌丝体。分析不同碳源、氮源对菌丝体生物量和三萜总量的影响。每次试验重复3次，结果取平均值。
2.3混合碳氮源培养基正交试验 根据单因素试验筛选结果，并考虑到低投入高产出的原则，选用米糠和蔗糖作为复合碳源，豆饼粉作为氮源，磷酸二氢钾和*作为无机盐，按l9（34）设计四因素三水平试验，9个组合，4次重复，优化培养基。
2.4发酵菌丝体生物量测定 采用细胞干重法，取100ml发酵液，用100目纱网过滤得菌丝体，并用蒸馏水反复冲洗，至滤出液澄清为止，收集菌丝体，于60℃鼓风干燥箱中烘干至恒重，称重。
三、（三萜含量测定）
3.1 标准溶液的制备（200μg/ml*）称取干燥至恒重的*20mg，置于100ml的容量瓶中加无水乙醇溶解，并定容至刻度，作为对照品溶液。
3.2样品溶液的制备 取样品0.5g（到万分之一），加入10ml无水乙醇，超声波提取30min后，摇匀，过滤，取滤液，定容至50ml，即得样品溶液。用分光光度法测定样品中灵芝三萜物质含量。
3.3 标准曲线的制作 精密吸取*标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml,于6只具塞磨口试管中。加5%*-冰醋酸液0.4ml，摇匀。再加入0.6ml高氯酸，置于60℃恒温水浴锅中20min，冰浴冷却后，加冰醋酸5.0ml，摇匀，置于室温15min后，按分光光度法（《中国药典》2005版 i部附录va），以试剂为空白，在545nm处比色测定吸光度值。以*浓度（g/ml） 为横坐标，吸光度a为纵坐标，作图得标准曲线。
3.4 样品的测定 吸取1ml样品溶液，按标准曲线方法测定吸光度。用标准曲线法计算样品中总三萜酸提取物质量。
以上内容仅供参考，如需了解详情请致电喆图！喆图人将真诚为您服务！
美国Ampco双螺杆泵--*代理--赫尔纳
IFM压缩空气流量计SD9500现货
一文了解螃蟹的选购技巧
造成矿井除尘设备布袋损坏的原因有哪些
旋转高压风机在各行业中的应用及优势说明
树舌灵芝深层发酵培养基的优化研究
兔白细胞介素17（IL-17）试剂盒（ELISA）
List-Magnetik磁场测量仪的功能性作用
风琴防护罩厂家告诉你风琴防护罩都有什么用途？
TB-1-B理疗型*仪台式技术参数
如何提高矿用电缆控制线芯的使用寿命
HZ-9211K台式气恒温振荡器有着广泛而重要的应用
BAUMER编码器GM400.A10A304性能
磁力泵在运转过程中需要注意的事项
小鼠5核苷酸酶elisa检测试剂盒样本处理及要求
英国Sheen光泽仪特点、参数
自动部份收集器的结构特点
马弗炉/灰化炉/实验室高温箱式炉 中西器材 型号:M366798
EN X5CrNiCuNb16-4上海隆继批发商
塑料拖链和钢制拖链的区别介绍