关于常见细胞裂解液及其组分介绍

在许多细胞内蛋白表达、纯化及蛋白-蛋白互作等免疫实验(如wb、ip、co-ip、chip)中,细胞裂解是关键一步。
基本介绍
根据不同细胞类型、蛋白定位及下游应用,需要不同的细胞裂解液进行细胞裂解及蛋白提取(表1)。
表1 根据不同蛋白定位选择裂解液
蛋白定位 裂解液
全细胞 np-40、ripa
细胞质(可溶性蛋白) tris-hcl
细胞质(细胞骨架等不溶性蛋白) tris-triton
细胞膜 np-40、ripa
细胞核 ripa
线粒体 ripa
差异化比较
ripa裂解液
ripa裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液,获得的蛋白样品可用于常规wb、ip等实验。
组分:25 mm tris-hcl, ph 7.6、150 mm nacl、1% np-40、1%去氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠(sds)。
ip裂解液
ip裂解液是一种改良后的ripa裂解液,具中等强度效力,可高效溶解细胞蛋白,但不会像ripa一样释放染色体组dna或破坏蛋白复合物。适合下游免疫沉淀或亲和吸附应用。
组分:25 mm tris-hcl, ph 7.4、150 mm nacl、1% np-40、1% mm edta、5% 甘油。
np-40裂解液
np-40裂解液是一种很温和的非离子型去垢剂,与蛋白结合力强,尤其适用于膜蛋白非变性条件下的溶解。
组分:50mm tris-hcl ph 8.0、150mm氯化钠、1%np-40;加蛋白酶抑制剂:yi肽酶、亮肽素、胃抑素,每种1μg / ml;使用前立即添加1mm pmsf。
tris-triton裂解液
tris-triton裂解液是非离子型表面活性剂,效力介于np-40和sds之间,下游应用有wb、elisa、ip。
组分:10mm 三羟甲基氨基甲烷(tris),ph值7.4、100mm nacl、1mm edta、1mm egta、1% triton x-100、10% 甘油、0.1% sds、0.5% 去氧胆酸钠。

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