谷丙转氨酶(alt/gpt)检测试剂盒使用说明!
产品名称:谷丙转氨酶(alt/gpt)检测试剂盒 微板法
检测原理:谷丙转氨酶(alt)在37℃及ph7.4条件下,作用于丙氨酸及a-酮戊二酸组成的底物,生成丙酮酸及谷氨酸。反应30分钟后(固定时间)加入2,4-二硝基苯肼(dnph)盐酸溶液,既中止反应,同时dnph与酮酸中羰基加成,生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色,于505nm比读吸光度并计算酶活力。
测定范围:本试剂盒可以测定各类动物血清(浆)、组织及培养细胞、细胞培养液等样本中谷丙转氨酶活力(alt)。
自备仪器和用品:
酶标仪(510nm或505nm)、微量移液器、漩涡混匀器
试剂组成:
96t
规格
组分
保存
试剂一
5mlx1瓶
谷丙转氨酶基质液
4℃冰箱保存6个月
试剂二
5mlx1瓶
2,4-二肖基苯肼液
4℃冰箱保存6个月
试剂三
5mlx1瓶
4mol/l氢氧化钠液
室温密封保存6个月
试剂四
1支
2umol/ml丙酮酸钠标准液
4℃冰箱保存6个月
试剂五
1支
0.1mol/l磷酸盐缓冲液
4℃冰箱保存6个月
0.4mol/l氢氧化钠液的配制:临用时按4mol/l氢氧化钠液:双蒸水=1:9的比例稀释,需多少配多少,室温密封保存。
操作过程(仅供参考)
1.样本前处理:
a.血清(浆)及其他液体待测样本:直接取样测定。
b.动物组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500转/分,离心10分钟,取上清液待测。
c.培养细胞样本前处理:将收集好的细胞用等渗缓冲液(推荐0.1mol/l ph7—7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水)清洗1—2次;1000转/分,离心10分钟,弃上清,留细胞沉淀,加入匀浆介质(推荐加入0.1mol/l ph7—7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水),冰浴条件下超声破碎或手动匀浆,制备好的匀浆液不离心,待测。
2.操作表:
测定孔
对照孔
基质液(ul)37℃已预温
2o
20
待测样本(ul)
5
测定孔每吸取一个样本,将吸嘴伸入孔板底部基质液中,反复吸打混匀后
37℃反应30分钟
2,4-二肖基苯肼液(ul)
20
20
待测样本(ul)
5
对照孔每吸取一个样本,将吸嘴伸入孔板底部液体中,反复吸打混匀后
37℃反应20分钟
0.4mol/l氢氧化钠液(ul)
200
200
轻轻水平摇动96孔板混匀,室温放置15分钟,510nm波长,酶标仪测各孔od值,以(绝对od值=测定孔0d值减去对照孔od值),查标准曲线,求得相应的alt/gpt活力单位。
注意事项:
1.比色法中常用的有赖氏(reitman-frankel)法及金氏法(king)法。赖氏法标准曲线所定单位数,是用实验方法和卡门氏反光光度法(速率法)作对比测定求得的。以卡门氏单位报告结果比较准确。
卡门氏单位定义:1ml液体,反应液总容量3ml,波长340nm,1cm光径,25℃,1min内所生成的丙酮酸,使nadh氧化成nad+而引起吸光度每下降0.001为一个单位(1卡门氏单位=0.482u/l,25℃)
2.一般血清标本内源性酮酸很少,血清对照孔吸光度值接近试剂空白孔(以双蒸水代替血清,其他和对照孔同样操作)。所以成批标本测定时,一般不需要每一标本都作本身血清对照孔,以试剂空白孔代替即可,但对严重脂血、黄疸或溶血血清,每份标本应做对照孔。
3.酶活力超过150单位时,用生理盐水稀释血清后重测。
4.一般的血清对照孔(或称标本空白孔)的吸光度作为日常质控的指标之一;如相差大,可考虑a-酮戊二酸浓度、dnph浓度及仪器等原因引起。
5.血清中alt在室温(25℃)可保存2天,在0--4℃可保存一周,在-25℃可保存1个月。
6.本产品仅供科研实验用,不做其它用途!
关键词:酶标仪 移液器
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