超低残留mNGS建库酶原料迎来新成员——UCF.ME® T4 PNK
近年来，全球爆发的传染性疾病（如埃博拉、猴痘）对公共健康构成了威胁，病原体的多样化和复杂化对病原体检测提出了更高的要求。传统的病原体检测方法如传统培养法、pcr法等存在时效性、准确性和范围的限制。而宏基因组测序（mngs）技术无需提前假设病原体的存在，覆盖范围广泛，成为有效解决复杂病原体检测需求的重要工具。
mngs是对标本中全部核酸进行高通量测序（ngs测序），并通过生物信息学分析以识别标本中病原体的检测方法，已成功应用于多种类型临床感染性疾病的病原体诊断、突发传染病的调查等领域。
mngs面临的挑战
mngs检测流程主要分为样本制备、文库构建、上机测序、数据分析四个流程（图1），在上述涉及的相关实验过程中，酶在其中起着至关重要的作用。由于商业化分子酶主要采用工程菌株（如大肠杆菌等）进行重组表达，因此分子酶中会存在一定量的宿主基因组dna残留。加上制备环境和人源等因素影响，分子酶制品中极易存在污染dna。在病原体检测过程中，污染的dna可能会淹没低丰度的靶标核酸或和靶标核酸一起被检出，从而影响结果的判读。
图1. illumina平台mrna文库构建及建库关键酶[1]
翌圣超低残留mngs建库酶原料
为解决病原检测背景菌干扰问题，翌圣通过子公司镁孚泰生物zymeeditor™酶进化平台，开发出多种高性能分子酶，搭配超低残留分子酶生产工艺与ucf.me®超洁净分子酶生产基地，可规模化提供用于mngs建库的全套高性能产品和超低残留分子酶原料，助力解决病原检测中的背景菌干扰，提高检测准确度。
表1. 翌圣超低残留mngs建库关键酶原料
应用场景
产品名称
残留水平
末端修复
ucf.me®t4 dna polymerase （超低残留t4 dna聚合酶）
1、宿主dna残留低：e. coli基因组dna残留＜0.1 copies/1 u；
2、核酸酶残留低：无核酸外切酶、切口酶残留。
ucf.me®t4 polynucleotide kinase （超低残留t4 多聚苷酸激酶）
1、宿主dna残留低：e. coli基因组dna残留＜0.01 copies/ 1 u；
2、核酸酶残留低：无核酸外切酶、切口酶残留；
a尾添加
hieff ucf.me®sensitive taq dna polymerase
（超低残留t4 dna聚合酶）
1、宿主dna残留低：e. coli基因组dna残留＜0.005 copies/ 1 u；
2、核酸酶残留低：无核酸外切酶、切口酶、rnase残留；
翌圣ucf.me®t4 polynucleotide kinase
ucf.me®t4 polynucleotide kinase(cat#14503es)是翌圣生物推出的又一款mngs关键酶。相较于常规t4 pnk，ucf.me®t4 polynucleotide kinase背景菌残留更低，专注于解决病原检测中的背景菌干扰，提高检测准确度。
部分数据展示
01e.coli基因组dna残留< 0.005 copies/1 u
对不同批次的翌圣超低残留t4 pnk (cat#14503es)进行宿主 (e.coli）基因组dna残留检测，结果显示翌圣超低残留t4 pnk宿主gdna残留远低于0.005 copies/1 u。
图2. t4 dna pnke.coli基因组dna残留检测
02无切口酶、核酸外切酶残留
将100 u不同批次的翌圣超低残留t4 pnk (cat#14503es)分别与底物dna在37℃孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，翌圣超低残留t4 pnk无切口酶、核酸外切酶残留。
图3. 翌圣t4 dna pnk无切口酶、外切酶残留
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定位
产品名称
产品货号
末端修复
ucf.me®t4 dna polymerase (3 u/μl)
14457es
ucf.me®t4 polynucleotide kinase (10 u/μl)
14503es
a尾添加
hieff ucf.me®hotstart sensitive taq dna polymerase (5 u/μl)
14314es
参考文献：
1.hand,liz,lir,tanp,zhangr,lij.mngsinclinicalmicrobiologylaboratories:ontheroadtomaturity.critrevmicrobiol.2019sep-nov;45(5-6):668-685.
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a尾添加
hieff ucf.me®sensitive taq dna polymerase
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02无切口酶、核酸外切酶残留
将100 u不同批次的翌圣超低残留t4 pnk (cat#14503es)分别与底物dna在37℃孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，翌圣超低残留t4 pnk无切口酶、核酸外切酶残留。
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参考文献：
1.hand,liz,lir,tanp,zhangr,lij.mngsinclinicalmicrobiologylaboratories:ontheroadtomaturity.critrevmicrobiol.2019sep-nov;45(5-6):668-685.
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