细胞趋化实验的工作流程
细胞趋化实验的工作流程
ibidi
ibidi chemotaxis 2d and 3d细胞趋化载玻片
可视2d/3d细胞趋化实验流程：
开始实验前
必要设备
基本要求：
倒置相差显微镜（推荐5倍或10倍物镜）
用于延时图像采集的相机
stage top培养箱（大多数哺乳动物细胞类型需要）
推荐扩展：
用于并行图像采集的电动载物台
自动对焦
1.样品制备步骤
使用ibidi µ-slide chemotaxis细胞趋化载玻片，可以进行具有定义的趋化梯度的可重现的趋化性测定。
首先，细胞接种，这可以在2d或3d环境中完成。孵育和细胞附着后，根据确定的加载方案，用趋化剂填充满每个腔室的两个储液池。
ibidi 的解决方案
µ-slide chemotaxis包含3个独立的腔室，用于使用缓慢或快速迁移的细胞进行平行趋化性测定。
它允许在可重现的环境中创建精确定义的、稳定的趋化梯度。
2.活细胞成像步骤
生理条件下的活细胞成像能够详细记录细胞随时间的迁移，这是正确分析趋化性测定所必需的过程。
成像周期的持续时间取决于细胞类型（例如，快速迁移的白细胞或缓慢迁移的肿瘤细胞或成纤维细胞）和环境条件（例如，趋化剂的类型和浓度）。用于缓慢迁移细胞的典型视频显微镜设置包括在24小时内每 2.5-10分钟拍摄一张照片。
由于每个实验最佳地包含来自20-40个单细胞的跟踪数据，因此应使用低倍显微镜物镜，例如4倍或10倍。
mda-mb-231 人乳腺癌细胞在胶原凝胶中迁移的延时显微成像。在 µ-slide chemotaxis 中以 egf 作为趋化剂观察细胞 24小时。生理条件由ibidi加热和气体培养系统维持。
ibidi的解决方案
ibidi stage top incubatorsibidi加热和气体培养系统提供显微镜下的生理环境，可在短期和长期趋化性测定期间实现活细胞成像。
3.细胞追踪步骤
通常趋化性测定的活细胞显微镜检查会创建时间图像堆栈，其中每个图像显示特定时间点的确切细胞位置。
为了量化它们的运动，通过确定它们在图像堆栈的每一帧上的位置来跟踪单个细胞。跟踪可以手动完成，也可以使用特殊软件自动完成。之后，每个跟踪单元格 (x, y)的位置值可用于每个时间点(t)并可以进一步分析。
使用imagej手动跟踪插件跟踪后的细胞跟踪可视化。
跟踪后imagej手动跟踪插件的输出；具有每个时间点（t）的每个被跟踪单元（x，y）的位置值的数据表。
ibidi的解决方案
自动跟踪和数据分析：
metavi labs的chemotaxis fasttrack ai image analysis图像分析是一种基于ai的自动图像分析解决方案，用于趋化性测定。基于网络的软件将快速而强大的细胞跟踪与人工智能 (ai) 相结合，无需标记即可进行客观且可重复的分析。只需将您的数据上传到您的fasttrack ai帐户，即可开始分析工作。在1到2小时内，您将收到一份详细的报告供下载和进一步评估。
手动跟踪：
imagej手动跟踪插件有助于在趋化性测定中手动跟踪细胞迁移。
4.数据分析趋化性测定数据分析步骤：
*数据绘图
*定量与统计分析
*数据解释
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ibidi
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1.样品制备步骤
使用ibidi µ-slide chemotaxis细胞趋化载玻片，可以进行具有定义的趋化梯度的可重现的趋化性测定。
首先，细胞接种，这可以在2d或3d环境中完成。孵育和细胞附着后，根据确定的加载方案，用趋化剂填充满每个腔室的两个储液池。
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2.活细胞成像步骤
生理条件下的活细胞成像能够详细记录细胞随时间的迁移，这是正确分析趋化性测定所必需的过程。
成像周期的持续时间取决于细胞类型（例如，快速迁移的白细胞或缓慢迁移的肿瘤细胞或成纤维细胞）和环境条件（例如，趋化剂的类型和浓度）。用于缓慢迁移细胞的典型视频显微镜设置包括在24小时内每 2.5-10分钟拍摄一张照片。
由于每个实验最佳地包含来自20-40个单细胞的跟踪数据，因此应使用低倍显微镜物镜，例如4倍或10倍。
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3.细胞追踪步骤
通常趋化性测定的活细胞显微镜检查会创建时间图像堆栈，其中每个图像显示特定时间点的确切细胞位置。
为了量化它们的运动，通过确定它们在图像堆栈的每一帧上的位置来跟踪单个细胞。跟踪可以手动完成，也可以使用特殊软件自动完成。之后，每个跟踪单元格 (x, y)的位置值可用于每个时间点(t)并可以进一步分析。
使用imagej手动跟踪插件跟踪后的细胞跟踪可视化。
跟踪后imagej手动跟踪插件的输出；具有每个时间点（t）的每个被跟踪单元（x，y）的位置值的数据表。
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手动跟踪：
imagej手动跟踪插件有助于在趋化性测定中手动跟踪细胞迁移。
4.数据分析趋化性测定数据分析步骤：
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