磷酸盐缓冲溶液配制方法及优化案例
缓冲液的作用是在一定的范围内缓冲调整溶液的ph值，使待测溶液的酸度符合分析方法所规定的范围。其中，磷酸盐缓冲液截止波长低于200nm，在较低分析波长下仍可使用，具有三个pka值，可提供1.1~3.1，6.2~8.2，11.3~13.3三个ph缓冲范围，是hplc在紫外检测条件下zui常用的缓冲液之一。
配制磷酸盐缓冲液时，通常所说的浓度0.01m指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非na+或k+的浓度，na+或k+的作用是调节渗透压。
各种浓度pb(ph=7.4)的配制：
先配0.2m pb（ph=7.4，100ml）：取0.2 mol/l的na2hpo4母液81ml及0.2mol/l的nah2po4母液19ml，混匀。然后只需将0.2m pb（ph=7.4）按相应比例
适当稀释即可，如：
0.1m pb（ph=7.4）：取500ml 0.2m pb，加水稀释至1l。
0.01m pb（ph=7.4）：取50ml 0.2m pb，加水稀释至1l。
0.02m pb（ph=7.4）：取100ml 0.2m pb，加水稀释至1l。
以上配制方法可供参考。日常配制流动相时常使用缓冲盐搭配酸/碱溶液进行ph调节。
在使用酸/碱溶液调节缓冲溶液的ph时，使用低浓度（0.1mol/l）比使用高浓度（1mol/l）引起的误差更小，对缓冲溶液ph的重复性和分析结果的重现性更有优势，尤其是针对一些对ph敏感的分析项目。
应用案例：
客户反馈参考应用报告的液相条件，同一台液相，不同天配制的流动相，配制方式一样，分离重现性不好，有时能分开，有时会重合无法分离。了解到客户称取磷酸盐后溶于1l超纯水中后，再滴加1mol/l碱溶液进行ph调节。此方法容易造成配制差异，引起峰分离情况差异。
优化流动相配制方法：
① 精密称取mg±0.001g磷酸盐，溶于约800ml超纯水中溶解。
② 预先配制0.1mol/l氢氧化钠/氢氧化钾溶液，称样量ng±0.001g，用量筒准确量取100ml碱溶液备用。
③ 将量取的碱溶液缓慢加入已溶解的磷酸盐溶液中，观察ph变化，达到目标ph后，停止加入碱溶液，记录所需碱溶液体积。
④ 再在缓冲盐溶液中加入超纯水定容至1l。
⑤ 后续配制只需量取固定体积的碱溶液加入固定称样量的缓冲溶液中，即可达到固定的ph。成功减小流动相配制差异，提高峰分离重现性。
效果见下图：
结论：
流动相ph的稳定性与准确性对样品分析的影响较大时，需尽量规避流动相配制时的人员误差，环境误差，仪器误差，物料称量误差等，以保证方法分析效果的重现性。
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先配0.2m pb（ph=7.4，100ml）：取0.2 mol/l的na2hpo4母液81ml及0.2mol/l的nah2po4母液19ml，混匀。然后只需将0.2m pb（ph=7.4）按相应比例
适当稀释即可，如：
0.1m pb（ph=7.4）：取500ml 0.2m pb，加水稀释至1l。
0.01m pb（ph=7.4）：取50ml 0.2m pb，加水稀释至1l。
0.02m pb（ph=7.4）：取100ml 0.2m pb，加水稀释至1l。
以上配制方法可供参考。日常配制流动相时常使用缓冲盐搭配酸/碱溶液进行ph调节。
在使用酸/碱溶液调节缓冲溶液的ph时，使用低浓度（0.1mol/l）比使用高浓度（1mol/l）引起的误差更小，对缓冲溶液ph的重复性和分析结果的重现性更有优势，尤其是针对一些对ph敏感的分析项目。
应用案例：
客户反馈参考应用报告的液相条件，同一台液相，不同天配制的流动相，配制方式一样，分离重现性不好，有时能分开，有时会重合无法分离。了解到客户称取磷酸盐后溶于1l超纯水中后，再滴加1mol/l碱溶液进行ph调节。此方法容易造成配制差异，引起峰分离情况差异。
优化流动相配制方法：
① 精密称取mg±0.001g磷酸盐，溶于约800ml超纯水中溶解。
② 预先配制0.1mol/l氢氧化钠/氢氧化钾溶液，称样量ng±0.001g，用量筒准确量取100ml碱溶液备用。
③ 将量取的碱溶液缓慢加入已溶解的磷酸盐溶液中，观察ph变化，达到目标ph后，停止加入碱溶液，记录所需碱溶液体积。
④ 再在缓冲盐溶液中加入超纯水定容至1l。
⑤ 后续配制只需量取固定体积的碱溶液加入固定称样量的缓冲溶液中，即可达到固定的ph。成功减小流动相配制差异，提高峰分离重现性。
效果见下图：
结论：
流动相ph的稳定性与准确性对样品分析的影响较大时，需尽量规避流动相配制时的人员误差，环境误差，仪器误差，物料称量误差等，以保证方法分析效果的重现性。
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