鼠抗人白细胞特异性单克隆抗体操作步骤
鼠抗人白细胞特异性单克隆抗体操作步骤:
1 . 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行
⒉ 缓冲液洗 3min/2 次。
⒊ 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 hydrogen peroxide block 中孵育 10-15 分钟。
⒋ 缓冲液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 ultra v block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
(注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清,这一步可以省略。)
⒍ 缓冲液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)
⒏ 缓冲液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 primary antibody enhancer (增强子),在室温下孵育 20 分钟。
10 .缓冲液洗 5min/2 次。
11 .滴加 hrp polymer (酶标二抗) ,在室温下孵育 30 分钟。
(注: hrp polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)
12 .缓冲液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml dab plus substrate (或 aec plus substrate) 中滴加 1-2 滴 dab plus chromogen (或 aec plus chromogen ),混匀后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。)
14 .自来水充分冲洗,复染 ,脱水,透明,封片。
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(注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清,这一步可以省略。)
⒍ 缓冲液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)
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10 .缓冲液洗 5min/2 次。
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12 .缓冲液洗 5min/2 次。
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