食物中*（维生素H）的测定方法
微生物测定法
1.原理
*对于lactobacillus plantarum（atcc8014）的正常生长是一种必需的营养素，在一定生长条件下，lactobacillusplantarum的生长与繁殖速度与溶液中*的含量成一定的线性关系，通过利用浊度法或光密度法测定**生长和繁殖的强度可间接地测定出食物样品中的*含量。*低检出限为0.003ng。
2.适用范围
本方法参考official methods of analysis of the association of officialanalytical chemists、methods of vitamin analysis以及methods of themicrobiological analysis of selectednutrients。本方法适用于测定各类食物及饲料中的*含量。
3.试剂
本试验所用水均为蒸馏水，所用试剂均需分析纯试剂。
3.1 甲苯。
3.2 1 mol/l硫酸溶液：在600ml水中加入55.6ml浓硫酸，稀释至1000ml。
3.3 3 mol/l硫酸溶液：在600ml水中加入166.7ml浓硫酸，稀释至1000ml。
3.4 10mol/l氢氧化钠溶液：溶200g氢氧化钠于水中，定容至500ml。
3.5 1：1（1+1）乙醇溶液：500ml无水乙醇与500ml水充分混匀。
3.6 酸解酪蛋白：称取50g不含维生素的酪蛋白于500ml烧杯中，加200ml 3mol/l盐酸，121℃高压水解6小时。将水解物转移至蒸发皿内，在沸水浴上蒸发至膏状。加200ml水使之溶解后再蒸发至膏状，如此反复3次，以去除盐酸。以溴酚蓝作外指示剂，用10mol/l氢氧化钠调节ph至3.5。加20g活性炭，振摇，过滤，如果滤液不呈淡黄色或无色，可用活性炭重复处理。滤液加水稀释至500ml，贮存于试剂瓶中，加少许甲苯于4℃冰箱中保存。
?酸解的目的是为了消除酪蛋白中的维生素，确保基本培养基中不含待测定的*，但有时酸水解不一定*，所以一定要选用不含维生素的酪蛋白粉（*好为sigma公司产品），这样可较好地确保酸解酪蛋白中不含*。
3.7 *、*溶液：称取4g l-*和1g l-*（或2gdl-*）于800ml水中，加热至70～80℃，逐滴加入1：5（1+5）盐酸，不断搅拌，直至*溶解为止。冷至室温，加水稀释至1000ml。加少许甲苯于4℃冰箱中保存。
3.8腺嘌呤、*、*溶液：称取硫酸腺嘌呤（纯度为98%）、盐酸*（生化试剂）以及*各0.1g于250ml烧杯中，加75ml水和2ml浓盐酸，然后加热使其*溶解，冷却，若有沉淀产生，加盐酸数滴，再加热，如此反复，直至冷却后无沉淀产生为止，以水稀释至100ml，贮存于试剂瓶中，加少许甲苯于冰箱中保存。
3.9维生素溶液：称取20mg核黄素，10mg盐酸硫胺素，10mg对氨基苯甲酸，40mg盐酸吡哆醇，用0.02mol/l乙酸溶液溶解并定容至1000ml。
3.10盐溶液：称取10g mgso4 7h2o、1g kcl、0.5g mnso4 4h2o，0.5g feso4 7h2o加23ml 85% h3po4，用水溶解并定容至500ml。
3.11*标准溶液溶液名称浓度配置方法标准储备溶液50μg / ml称取25mg无水*用（1+1）乙醇溶液定至500ml，于4℃冰箱中贮存。标准中间液ⅰ1μg / ml取5ml储备液用（1+1）乙醇溶液定容至250ml，于2-4℃冰箱中贮存。标准中间液ⅱ10 ng / ml取5ml中间液ⅰ用（1+1）乙醇溶液定容500ml，于2-4℃冰箱中贮存标准工作液1 ng / ml取5ml中间液ⅱ用去离子水定容至50ml，在2-4℃冰箱中贮存。
3.12基本培养基：将下列试剂混合于500ml烧杯中，加水至200ml，以溴*蓝作外指示剂，用10mol/l氢氧化钠液调节ph至6.8，用水稀释至250ml。
酸解酪蛋白 25ml
*、*溶液 25ml
腺嘌呤、*、*溶液 5ml
维生素溶液 5ml
盐溶液 5ml
* 5g
无水醋酸钠 5g
此培养基也可从difco公司购得，产品号为no.0419-15-8。
?由于国内的某些试番茄汁，10ml吐温-80，5.0~7.5g琼脂，加热溶解，用（2+3）氢氧化钠调节ph为6.5~6.8，然后定容至1000ml，分装于试管，于121℃高压**10分钟，取出后竖直试管，待冷却至室温后于冰箱2-4℃保存。
3.13生理盐水：称取9.0g氯化钠溶于1000ml水中，。每次使用时分别倒入2~4支10ml试管中，每支约加10ml，塞好棉塞，于121℃高压**10分钟，备用。
3.14 0.4g/l溴*蓝溶液：称取0.1g溴*蓝于小研钵内，加1.6ml 0.1mol/l氢氧化钠研磨，加少许水继续研磨，直至*溶解，用水稀释至250ml。
3.15 0.4g/l溴甲酚绿溶液：称取0.1g溴甲酚绿于小研钵中，加1.4ml 0.1mol/l氢氧化钠研磨，加少许水继续研磨，直至*溶解，用水稀释至250ml。
3.16 1g/l溴酚蓝乙醇溶液：称取0.1g溴酚蓝，用乙醇溶解后，加乙醇稀释至100ml。
3.17番茄汁：将新鲜番茄去皮、去籽后，制成匀浆，用纱布多次过滤，直至滤液呈淡黄色透明液体，滴加几滴甲苯于液体表面，放置冰箱中冷冻保存。
4.仪器与设备
（1） 实验室常用设备
（2） 电热恒温培养箱
（3） 压力蒸汽**器
（4） 液体快速混合器
（5） 离心机
（6） 分光光度计
（7） 硬质玻璃试管：20mm×150mm
5.菌种与培养液的制备与保存
5.1 储备菌种的制备：lactobacillus plantarum（atcc8014）接种于直面琼脂培养管中，在37±0.5℃恒温箱中培养16~24小时，取出后放入冰箱中保存，每隔一周至少传种一次。在实验前**必须传种一次。
5.2 种子培养液的制备：加2ml*标准应用液和3ml基本培养基于10ml离心管中，塞好棉塞，于121℃高压**10分钟，取出，冷却后于冰箱中保存。每次制备两管，备用。
? 加入离心管中的*标准液要适量，过少会影响lactobacillusplantarum的生长，过多会使零管中的光密度值增大，影响测定结果的准确性。一般2～3ml标准工作掖即可。
6.操作步骤
6.1 接种液的配制：使用前**，将已在琼脂管中生长16～24小时的l.plantarum接种于种子培养液中，在37±0.5℃培养16～24小时，取出后离心10分钟（3000rpm），弃去上清液，用已**的生理盐水淋洗2次，再加入3ml**生理盐水，混匀后，将此液倒入已**的注射器中，立即使用。
? 菌种的淋洗一定要*，否则部分残留在**表面的*会使空白管的光密度值升高，影响结果的准确性。
6.2样品制备：称取适量样品，放入100ml三角瓶中，加50ml1mol/l硫酸（水解动物样品用3mol/l硫酸，水解植物样品及混合型样品用1mol/l硫酸），混匀后于121℃高压水解90分钟，取出冷却至室温。以溴甲酚绿为外指示剂，用10mol/l氢氧化钠溶液调节ph为4.5，将水解液移至100ml容量瓶中，定容，过滤。样品水解液只能在4℃冰箱保存2～3天。取适量水解液于25ml具塞刻度试管中，以溴*蓝为外指示剂，用0.1mol/l氢氧化钠调节至ph为6.8，用水稀释至刻度。
6.3 样品试管的制备:于平行样品管中分别加入1.0、2.0、3.0、4.0ml样品水解液，加水至5ml，然后再加入5ml基本液体培养基。
6.4 标准系列管的制备:每组试管中分别加入*标准工作液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，（相当于0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ng）加水至5ml，再加入5ml基本液体培养基，需做三组标准曲线。
6.5 **：样品管与标准系列管均用棉塞塞好，于121℃条件下高压**10分钟
? **时间不宜过长，否则会破坏基本培养基中的营养成分，影响lactobacillusplantarum的生长，*好在5-10分钟内。
6.6 接种与培养：待试管冷至室温后，每管接种一滴种子液，于37±0.5℃恒温箱中培养16~20小时。
?（1）接种前，接种室要在紫外灯下**至少30分钟。（2）在接种时，其中一支标准系列0管可不接种，这样可观察此次实验是否存在污染，并且可消除由于管中液体的颜色造成的误差。
6.7 测定：分光光度计，波长550nm条件下，以标准系列0管调零测定样品管及标准管的光密度值。
?首先以未接种的标准系列0管进行仪器调零，然后在用接种后的标准系列0管进行二次调零，之后再测定其他管中液体的光密度值。两次调零的目的在于*消除液体本身的颜色及污染对实验结果的影响.
7.计算
以*标准系列的不同纳克数为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。在曲线上查出相对应的样品测定管中的*含量，然后再按以下公式计算样品中*含量：
c·v·f
x= ---------------- ×100
m×1000
式中 x──样品中*含量，μg/100g：
c──测定管中的*含量，ng：
v──样品水解液的定容体积，ml：
f──样品液的稀释倍数
m──样品质量，g。
100/1000 ── 单位换算系数
8.注意事项
在实验过程中，一定要注意避免油脂的污染，因为当有油脂存在时，会刺激lactobacillus plantarum（atcc8014）快速生长，导致其生长速度不再与*的含量呈线性关系。因此在实验前，要检查所用玻璃器皿的表面是否已*清洗，操作者的双手不要涂摸各种护手霜，以防此类油脂进入被测液体中。
您可能会对本公司的以下产品感兴趣：
凯氏定氮仪∣脂肪测定仪∣粗纤维测定仪∣定氮仪∣索氏提取器∣消化炉∣索氏提取仪∣索氏抽提器∣索氏抽提仪∣快速水分测定仪∣粗脂肪测定仪∣可见分光光度计∣紫外可见分光光度计∣分光光度计∣罗维朋比色计∣超级恒温槽∣低温恒温槽∣旋转式粘度计∣快速水份测定仪∣电导率测定仪∣酸度计∣蛋白质测定仪∣马弗炉∣消煮炉∣马福炉∣粉碎机∣电子天平∣凯式定氮仪∣氮磷钙测定仪∣旋转蒸发器∣白度测定仪∣脂肪测定仪∣粗纤维测定仪
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Chromalox低压加热器的工作原理
PDM在夹具管理方面的应用
食品杀菌锅设备特点
Proportion-Air比例阀在航空航天中的应用
Z273X电液动浆液阀结构特征
食物中*（维生素H）的测定方法
暖气防丢水臭味剂效果怎么样
排屑机的发展历史应用
实验室净化工程所需设备
离心风机的生产效率与哪些因素有关
电动调节阀在安装使用时的注意事项
三工序门板开料机 数控木工雕刻机
什么是 SIPART PS2 智能阀门定位器的初始化,为什么要做初始化?
上银直线导轨是选用什么材质？
婴儿智能全自动*
多功能高空接线钳的现场操作步骤
防爆冰箱冷藏柜如何选择与使用？
过滤机的安装注意事项分享
液相色谱仪出现畸形峰的解决办法
昆山舒美超声波清洗机换热器板片污垢主要成份及清洗剂
1.原理
*对于lactobacillus plantarum（atcc8014）的正常生长是一种必需的营养素，在一定生长条件下，lactobacillusplantarum的生长与繁殖速度与溶液中*的含量成一定的线性关系，通过利用浊度法或光密度法测定**生长和繁殖的强度可间接地测定出食物样品中的*含量。*低检出限为0.003ng。
2.适用范围
本方法参考official methods of analysis of the association of officialanalytical chemists、methods of vitamin analysis以及methods of themicrobiological analysis of selectednutrients。本方法适用于测定各类食物及饲料中的*含量。
3.试剂
本试验所用水均为蒸馏水，所用试剂均需分析纯试剂。
3.1 甲苯。
3.2 1 mol/l硫酸溶液：在600ml水中加入55.6ml浓硫酸，稀释至1000ml。
3.3 3 mol/l硫酸溶液：在600ml水中加入166.7ml浓硫酸，稀释至1000ml。
3.4 10mol/l氢氧化钠溶液：溶200g氢氧化钠于水中，定容至500ml。
3.5 1：1（1+1）乙醇溶液：500ml无水乙醇与500ml水充分混匀。
3.6 酸解酪蛋白：称取50g不含维生素的酪蛋白于500ml烧杯中，加200ml 3mol/l盐酸，121℃高压水解6小时。将水解物转移至蒸发皿内，在沸水浴上蒸发至膏状。加200ml水使之溶解后再蒸发至膏状，如此反复3次，以去除盐酸。以溴酚蓝作外指示剂，用10mol/l氢氧化钠调节ph至3.5。加20g活性炭，振摇，过滤，如果滤液不呈淡黄色或无色，可用活性炭重复处理。滤液加水稀释至500ml，贮存于试剂瓶中，加少许甲苯于4℃冰箱中保存。
?酸解的目的是为了消除酪蛋白中的维生素，确保基本培养基中不含待测定的*，但有时酸水解不一定*，所以一定要选用不含维生素的酪蛋白粉（*好为sigma公司产品），这样可较好地确保酸解酪蛋白中不含*。
3.7 *、*溶液：称取4g l-*和1g l-*（或2gdl-*）于800ml水中，加热至70～80℃，逐滴加入1：5（1+5）盐酸，不断搅拌，直至*溶解为止。冷至室温，加水稀释至1000ml。加少许甲苯于4℃冰箱中保存。
3.8腺嘌呤、*、*溶液：称取硫酸腺嘌呤（纯度为98%）、盐酸*（生化试剂）以及*各0.1g于250ml烧杯中，加75ml水和2ml浓盐酸，然后加热使其*溶解，冷却，若有沉淀产生，加盐酸数滴，再加热，如此反复，直至冷却后无沉淀产生为止，以水稀释至100ml，贮存于试剂瓶中，加少许甲苯于冰箱中保存。
3.9维生素溶液：称取20mg核黄素，10mg盐酸硫胺素，10mg对氨基苯甲酸，40mg盐酸吡哆醇，用0.02mol/l乙酸溶液溶解并定容至1000ml。
3.10盐溶液：称取10g mgso4 7h2o、1g kcl、0.5g mnso4 4h2o，0.5g feso4 7h2o加23ml 85% h3po4，用水溶解并定容至500ml。
3.11*标准溶液溶液名称浓度配置方法标准储备溶液50μg / ml称取25mg无水*用（1+1）乙醇溶液定至500ml，于4℃冰箱中贮存。标准中间液ⅰ1μg / ml取5ml储备液用（1+1）乙醇溶液定容至250ml，于2-4℃冰箱中贮存。标准中间液ⅱ10 ng / ml取5ml中间液ⅰ用（1+1）乙醇溶液定容500ml，于2-4℃冰箱中贮存标准工作液1 ng / ml取5ml中间液ⅱ用去离子水定容至50ml，在2-4℃冰箱中贮存。
3.12基本培养基：将下列试剂混合于500ml烧杯中，加水至200ml，以溴*蓝作外指示剂，用10mol/l氢氧化钠液调节ph至6.8，用水稀释至250ml。
酸解酪蛋白 25ml
*、*溶液 25ml
腺嘌呤、*、*溶液 5ml
维生素溶液 5ml
盐溶液 5ml
* 5g
无水醋酸钠 5g
此培养基也可从difco公司购得，产品号为no.0419-15-8。
?由于国内的某些试番茄汁，10ml吐温-80，5.0~7.5g琼脂，加热溶解，用（2+3）氢氧化钠调节ph为6.5~6.8，然后定容至1000ml，分装于试管，于121℃高压**10分钟，取出后竖直试管，待冷却至室温后于冰箱2-4℃保存。
3.13生理盐水：称取9.0g氯化钠溶于1000ml水中，。每次使用时分别倒入2~4支10ml试管中，每支约加10ml，塞好棉塞，于121℃高压**10分钟，备用。
3.14 0.4g/l溴*蓝溶液：称取0.1g溴*蓝于小研钵内，加1.6ml 0.1mol/l氢氧化钠研磨，加少许水继续研磨，直至*溶解，用水稀释至250ml。
3.15 0.4g/l溴甲酚绿溶液：称取0.1g溴甲酚绿于小研钵中，加1.4ml 0.1mol/l氢氧化钠研磨，加少许水继续研磨，直至*溶解，用水稀释至250ml。
3.16 1g/l溴酚蓝乙醇溶液：称取0.1g溴酚蓝，用乙醇溶解后，加乙醇稀释至100ml。
3.17番茄汁：将新鲜番茄去皮、去籽后，制成匀浆，用纱布多次过滤，直至滤液呈淡黄色透明液体，滴加几滴甲苯于液体表面，放置冰箱中冷冻保存。
4.仪器与设备
（1） 实验室常用设备
（2） 电热恒温培养箱
（3） 压力蒸汽**器
（4） 液体快速混合器
（5） 离心机
（6） 分光光度计
（7） 硬质玻璃试管：20mm×150mm
5.菌种与培养液的制备与保存
5.1 储备菌种的制备：lactobacillus plantarum（atcc8014）接种于直面琼脂培养管中，在37±0.5℃恒温箱中培养16~24小时，取出后放入冰箱中保存，每隔一周至少传种一次。在实验前**必须传种一次。
5.2 种子培养液的制备：加2ml*标准应用液和3ml基本培养基于10ml离心管中，塞好棉塞，于121℃高压**10分钟，取出，冷却后于冰箱中保存。每次制备两管，备用。
? 加入离心管中的*标准液要适量，过少会影响lactobacillusplantarum的生长，过多会使零管中的光密度值增大，影响测定结果的准确性。一般2～3ml标准工作掖即可。
6.操作步骤
6.1 接种液的配制：使用前**，将已在琼脂管中生长16～24小时的l.plantarum接种于种子培养液中，在37±0.5℃培养16～24小时，取出后离心10分钟（3000rpm），弃去上清液，用已**的生理盐水淋洗2次，再加入3ml**生理盐水，混匀后，将此液倒入已**的注射器中，立即使用。
? 菌种的淋洗一定要*，否则部分残留在**表面的*会使空白管的光密度值升高，影响结果的准确性。
6.2样品制备：称取适量样品，放入100ml三角瓶中，加50ml1mol/l硫酸（水解动物样品用3mol/l硫酸，水解植物样品及混合型样品用1mol/l硫酸），混匀后于121℃高压水解90分钟，取出冷却至室温。以溴甲酚绿为外指示剂，用10mol/l氢氧化钠溶液调节ph为4.5，将水解液移至100ml容量瓶中，定容，过滤。样品水解液只能在4℃冰箱保存2～3天。取适量水解液于25ml具塞刻度试管中，以溴*蓝为外指示剂，用0.1mol/l氢氧化钠调节至ph为6.8，用水稀释至刻度。
6.3 样品试管的制备:于平行样品管中分别加入1.0、2.0、3.0、4.0ml样品水解液，加水至5ml，然后再加入5ml基本液体培养基。
6.4 标准系列管的制备:每组试管中分别加入*标准工作液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，（相当于0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ng）加水至5ml，再加入5ml基本液体培养基，需做三组标准曲线。
6.5 **：样品管与标准系列管均用棉塞塞好，于121℃条件下高压**10分钟
? **时间不宜过长，否则会破坏基本培养基中的营养成分，影响lactobacillusplantarum的生长，*好在5-10分钟内。
6.6 接种与培养：待试管冷至室温后，每管接种一滴种子液，于37±0.5℃恒温箱中培养16~20小时。
?（1）接种前，接种室要在紫外灯下**至少30分钟。（2）在接种时，其中一支标准系列0管可不接种，这样可观察此次实验是否存在污染，并且可消除由于管中液体的颜色造成的误差。
6.7 测定：分光光度计，波长550nm条件下，以标准系列0管调零测定样品管及标准管的光密度值。
?首先以未接种的标准系列0管进行仪器调零，然后在用接种后的标准系列0管进行二次调零，之后再测定其他管中液体的光密度值。两次调零的目的在于*消除液体本身的颜色及污染对实验结果的影响.
7.计算
以*标准系列的不同纳克数为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。在曲线上查出相对应的样品测定管中的*含量，然后再按以下公式计算样品中*含量：
c·v·f
x= ---------------- ×100
m×1000
式中 x──样品中*含量，μg/100g：
c──测定管中的*含量，ng：
v──样品水解液的定容体积，ml：
f──样品液的稀释倍数
m──样品质量，g。
100/1000 ── 单位换算系数
8.注意事项
在实验过程中，一定要注意避免油脂的污染，因为当有油脂存在时，会刺激lactobacillus plantarum（atcc8014）快速生长，导致其生长速度不再与*的含量呈线性关系。因此在实验前，要检查所用玻璃器皿的表面是否已*清洗，操作者的双手不要涂摸各种护手霜，以防此类油脂进入被测液体中。
您可能会对本公司的以下产品感兴趣：
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什么是 SIPART PS2 智能阀门定位器的初始化,为什么要做初始化?
上银直线导轨是选用什么材质？
婴儿智能全自动*
多功能高空接线钳的现场操作步骤
防爆冰箱冷藏柜如何选择与使用？
过滤机的安装注意事项分享
液相色谱仪出现畸形峰的解决办法
昆山舒美超声波清洗机换热器板片污垢主要成份及清洗剂