新品│endonuclease viii:精准切割dna受损碱基,助力基因损伤修复研究
核酸内切酶ⅷ(endonuclease viii, endo ⅷ)是一种具有n-糖基化酶活性(n-glycosylase)和ap-裂解酶(ap-lyase)活性的dna损伤修复酶,参与氧化产生的dna损伤的碱基切除修复。
作用原理endonuclease viii识别双链dna上受损碱基并在其n-糖基化酶活性作用下切除双链dna上受损的嘧啶碱基,产生一个脱嘌呤(ap)位点。随后,在其ap裂解酶活性作用下切割ap位点的3'和5'端,产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口。
图1. endonucleaseviii反应原理示意图
翌圣endonuclease ⅷ翌圣的endonuclease ⅷ(cat#14536es)由分子酶改造平台——zymeeditor™重组表达而来,高纯度,无核酸外切酶、核酸内切酶以及rnase残留。可应用于单细胞凝胶电泳、ngs建库中dna损伤修复、酶法合成dna中释放dna链、碱洗脱,搭配udg(cat#10303es)进行含u片段的克隆等。
数据展示01受损碱基切除效果与进口品牌一致分别使用翌圣与进口品牌n*的endonuclease ⅷ催化20 pmol寡聚核苷酸,20 µl反应体系中加入5~40 u的endonuclease ⅷ 和相同酶活的udg(cat#10303es),37℃孵育1 h。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,翌圣endonuclease ⅷ与进口品牌n*的碱基切除效果一致。
图2.受损碱基切除效果对比
02无核酸外切酶、核酸内切酶、rnase残留将10 u endonuclease viii分别与相应的底物dna/rna在37℃孵育4 h,琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,endonuclease viii 无核酸外切酶、核酸内切酶、rnase残留。
图3. 核酸外切酶、核酸内切酶、rnase残留检测结果
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