采血年龄对牛血清性能的影响

牛血清是细胞培养基的重要组成部分,其质量好坏对细胞状态及数量增长速度影响很大。常用的有胎牛血清、新生牛血清及小牛血清。牛的采血年龄是这三种血清区分的显著标志。小牛血清的采集对象是出生1年之内的小牛,新生牛血清是出生24小时至2周内的新生牛,胎牛血清则是6-10个月的胎牛。随着采血年龄的增加,牛血清中的生长因子减少,抗体和补体等含量增加。因此,鉴别血清原料的采血年龄段,防止成牛血清的参入是血清品质检测者所面临的一个重要问题。
有研究人员通过不同年龄段的牛血清在不同浓度下对sp2/0细胞株培养效果的比较试验,用大增殖浓度、倍增时间、克隆率等指标来推断样品血清的采血年龄段,其结果如下:
sp2/0细胞株为鼠骨髓瘤细胞。首先,研究人员在无菌条件下,将7个供试血清0.22μm过滤除菌,然后将供试血清按10%、8%、6%、4%、2%的浓度分别加到mem培养基稀释好的细胞悬液中使细胞浓度为1×104/ml。充分混匀后在96孔细胞培养板中每孔接种0.2ml,每个试验样接种8孔。每24 h记数一孔,共记数7d。研究人员又将供试血清按8%的血清浓度加到mem培养基稀释好的细胞悬液中,将sp2/0细胞稀释到5个/ml,分别接种到96孔细胞培养板中,每孔0.2ml,每个供试血清样品接种48孔,一周后计数克隆生成孔数。
结果显示,在克隆率方面,采血年龄越小,效果越好,胎牛血清培养的细胞克隆率为85.4%,6h新生牛血清为79.1%,6月龄小牛血清为50%。在促细胞生*应方面,随着血清浓度从2%提高到10%,细胞大增殖数不断升高,倍增时间缩短。血清浓度相同时,采血年龄约越小,细胞数高,倍增时间越短。不同年龄段的牛血清对促细胞生*应的影响呈现比较明显的差异性。
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上海威正翔禹生物公司提供的ausbian精制新生牛血清(货号:vs500n)为澳洲进口,血源来自新西兰出生在4天内的新生牛。血清经过严格质控,如检测总蛋白、支原体、牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒等,并经0.22m过滤和gamma射线照射,指标达标,经广泛使用,受到好评。
参考文献
李倬,等.促细胞生*应试验对牛血清采血年龄段判定的探讨.西北民族大学学报.2003,24(3):59-66

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